[发明专利]一种重金属离子的可视化定量检测新方法

权利要求书

1.一种金属的检测方法，其特征在于，所述方法包括体外核酸扩增技术,所述体外核酸扩增技术的反应体系包括下述1)-2)中的至少一种：

1)上游引物，所述上游引物包括：互补序列A、连接臂、互补序列B、可特异性扩增模板的核苷酸序列和可与待测金属结合的核苷酸；所述连接臂位于所述互补序列A和互补序列B之间，所述可特异性扩增模板的核苷酸序列和可与待测金属结合的核苷酸位于所述上游引物的5’端或3’端；所述互补序列A和所述互补序列B的核苷酸序列互补和/或反向互补；所述连接臂包括可抑制聚合酶结合的结构和/或可抑制体外核酸扩增过程中新链延伸的结构；

2)模板，所述模板包括与待测金属结合的核苷酸相互补的核苷酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括下述1)-3)中的至少一种：

1)所述体外核酸扩增技术包括超快速PCR反应，所述超快速PCR反应的反应过程包括：90-98℃，2-6s；50-60℃，2-8s；共20-40个循环；

2)所述连接臂包括具长链结构的化合物；

3)所述可与待测金属结合的核苷酸具体包括含胸腺嘧啶或胞嘧啶的核苷酸。

3.根据权利要求1和/或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括下述1)-4)中的至少一种：

1)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述上游引物时，所述上游引物包括：将序列表中SEQ ID №：1和SEQ ID №：2所示的核苷酸序列通过连接臂连接后得到的引物；

2)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述上游引物时，所述上游引物包括：将序列表中SEQ ID №：1和/或SEQ ID №：2所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：1和/或SEQ ID №：2所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列通过连接臂连接后得到的引物；

3)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述模板时，所述模板包括：序列表中SEQID №：4所示的核苷酸序列；

4)当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述模板时，所述模板包括：将序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

具体的，当所述体外核酸扩增技术的反应体系包括所述下游引物时，所述下游引物包括：序列表中SEQ ID №：3所示的核苷酸序列、和/或将序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

具体的，所述连接臂为oxyethyleneglycol bridge，oxyethyleneglycol的化学结构为：

具体的，所述上游引物包括：AGAGAGAGAGAGGGAAAGAGAGAG-oxyethylenegl ycolbridge-CTCTCTCTTTCCCTCTCTCTCTCTGTGAAATTATCGCCACGTTCGGTTTT；

具体的，所述下游引物还包括在所述下游引物上标记免疫标记；所述免疫标记包括生物素；所述生物素标记在所述下游引物的5’端第一个核苷酸上；再具体的，所述下游引物为Biotin-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC。

4.根据权利要求1、2和/或3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括核酸自组装显色反应,所述核酸自组装显色反应的反应体系包括发卡序列，所述发卡序列包括发卡序列一和/或发卡序列二，所述发卡序列一包括：互补序列C、互补序列D和3个以上的任意核苷酸，所述3个以上的任意核苷酸位于所述发卡序列的5’端和/或3’端；所述发卡序列二包括互补序列E和互补序列F；所述互补序列D与互补序列F互补和/或反向互补；所述互补序列C与所述互补序列A和/或互补序列B互补和/或反向互补，所述互补序列C与所述互补序列E互补和/或反向互补。