[发明专利]一种莱斯利鸟巢蕨种苗组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种繁殖速度快、成本低且能能保持莱斯利鸟巢叶片顶端整齐均匀分叉的莱斯利鸟巢蕨种苗的组培快繁方法。本发明包括以下步骤：（1）取莱斯利鸟巢根状茎作为外植体并进行无菌处理,在切口处分化出小颗粒的原球茎；（2）取上述原球茎置于MS培养基中进行培养，每个原球茎分化出3～4个新的原球茎，进行无菌苗的增殖培养；（3）将原球茎置于MS培养中培养，每颗原球茎长出1～3棵小苗，再将长出的每棵小苗置于另一种MS培养基中培养，即进行移栽驯化，洗净无菌苗根部的培养液并移栽进泥炭土和珍珠岩组成的基质内。本发明可应用于莱斯利鸟巢蕨培育领域。

技术领域

本发明涉及一种植物培养方法，尤其涉及一种莱斯利鸟巢蕨（Asplenium Nidus“Lesley”）种苗的组培快繁方法。

背景技术

莱斯利鸟巢蕨（Lesley，铁角蕨科巢蕨属 Asplenium Nidus，原产地：亚洲东南部，澳大利亚东部，印度尼西亚，印度和非洲东部）作为鸟巢蕨家族中的一员，其叶片顶端扫把状分叉叶形状，更是深受人们的喜爱。

现有的莱斯利鸟巢蕨培育一般是采用的分株进行繁殖的方法，一棵鸟巢蕨一年只能繁殖出3～4棵，因其繁殖系数低，远不能满足市场的需要。因此，目前鸟巢蕨的繁殖方法多采用孢子播种法，以及组织培养法，而目前鸟巢蕨的组织培养法也是利用孢子为原材料进行快繁，具体工艺是：把经过消毒灭菌的孢子囊从孢子叶上切下,破碎取出孢子后接种到培养基上,孢子萌发较快,萌发率高。萌发后的原叶体接种到不添加激素的MS培养基上能得到较大的增殖系数。 无论是孢子播种法还是利用孢子为原材料进行的组织培养法，都能快速的得到大量鸟巢蕨苗，但是对于莱斯利鸟巢蕨，孢子繁殖和利用孢子为原材料进行的快繁苗都有30%左右无法完美继承叶片顶端扫把状美丽分叉均，因此种植过程中需要进行筛选才能得到整齐统一的莱斯利鸟巢。又因为莱斯利只有叶片顶端分叉处才能收集到成熟的孢子，相对普通鸟巢蕨，收集大量孢子也比较困难一点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本低且能能保持莱斯利鸟巢叶片顶端整齐均匀分叉的莱斯利鸟巢蕨种苗的组培快繁方法。

本发明所采用的技术方案是，该方法包括以下步骤：

（1）诱导与分化：取莱斯利鸟巢根状茎作为外植体并进行无菌处理，取经过无菌处理的根状茎切成若干块状并放入加有BA0.2～1.0mg/L和IAA 1～3mg/L的MS培养基中培养，温度为22～24度，光照1800～2000lux，光照时间每天12小时，培养18周后，切口处分化出小颗粒的原球茎；

（2）无菌苗的增殖培养：取上述原球茎置于含有0.2～0.5mg/L的BA、0.1～0.5mg/L的KT和3%的糖的MS培养基中，培养六周后，每个原球茎可多分化出3～4个新的原球茎，培养环境要求为：22～24度，光照2500lux，每天光照12小时；

（3）无菌苗的移栽驯化：将原球茎置于含有3%的糖和3g/L的活性炭且无激素的MS培养基中培养4周后，每颗原球茎开始长出2～4棵0.5厘米小苗，再将小苗置于含有0.5～1mg/L的IBA和3%的糖的MS培养基中培养四周，每棵苗长成1～1.5厘米的小苗，并有两三条黑色的小须根，进行移栽驯化，洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为5：1的基质内，保持温度为18～25度，光照3000～7000lux，移栽后的第一周用无纺布覆盖，控制湿度85～95%，保持叶表面水雾不干。

进一步地，所述步骤（1）中，对莱斯利鸟巢蕨根状茎进行无菌处理的步骤为：将所述根状茎剥干净外面的叶鞘及毛鳞，先用75%的酒精处理10秒，再在0.1%的升汞溶液中浸泡8～10分钟取出，然后用无菌水冲洗4～5次。

进一步地，所述步骤（3）中还包括以下步骤：栽前3～4天打开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件。