[发明专利]检测目标抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种检测目标抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用，该试剂盒采用一步法竞争法反应模式，该反应模式能特异性检测出IgG、IgA、IgM等anti‑Carp Ab，从而省略传统间接法中需要洗涤的过程，形成一步法完成整个反应。其与传统间接法相比的既省时又免清洗，操作简便。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测目标抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。

背景技术

抗氨甲酰化蛋白抗体(anti-Carbamylated protein antibody，anti-Carp Ab)是最近几年发现的与类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)疾病诊断和病程监控的密切相关的一个新的生物标志物。氨甲酰化是一种非酶介导的蛋白质翻译后修饰方式，其具体过程是蛋白质的赖氨酸残基在尿素的衍生物一氰酸酯或氰酸盐的作用下转变成高瓜氨酸残基。该过程能打破人体免疫耐受并诱导自身免疫抗体抗-Carp抗体(anti-Carp Ab)的产生。

专利WO2012/105838A1及WO2016/014612A2中公开的anti-Carp Ab的检测方法分别为以氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)和氨甲酰化人类α1抗胰蛋白酶(Car-hAlAT)作为抗原，采用免疫印迹法(Immunoblotting)及酶联免疫吸附法(ELISA)进行测定。

专利WO2012/105838A1中的检测方法存在的缺陷是：1、人体内的anti-Carp Ab是针对自身体内氨甲酰化蛋白所产生的抗体，而氨甲酰化胎牛血清(Car-FCS)作为动物源性的抗原，与人体自身氨甲酰化蛋白所具有的抗原表位并不完全相同；2、氨甲酰化胎牛血清中包含大量可与人类血清样本中anti-Carp Ab抗体及其他免疫球蛋白非特异性相互作用的蛋白质及其它复杂组分，导致实验的背景值高，从而对结果分析产生干扰；3、氨甲酰化胎牛血清难以重复制备，存在着批间差异，可能会对实验结果复现性产生影响；4、检测的anti-Carp Ab的亚型仅为IgA和IgG、并未对IgM和IgD型抗体进行检测；5、采用免疫印迹法(Immunoblotting)进行检测时实验步骤较为复杂、不同检测机构的实验操作标准不一、耗时长、不能实现全自动高通量分析及采用动物血清作为二抗进行检测时在印迹膜上产生的非特异性检测条带对实验结果的干扰。

专利WO2016/014612A2中的检测方法存在的缺陷是采用的是ELISA间接法对anti-Carp Ab进行检测，检测背景值较高、灵敏度较低、线性范围窄、易产生假阳性的实验结果；同时针对检测不同亚型的抗体，需要采用相应的酶标二抗进行检测，实验操作较为繁琐。同时在检测过程中为避免样本中非特异性的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)(非特异性IgG是指除抗氨甲酰化蛋白抗体之外的其它IgG)对测试结果产生的干扰，需要增大酶标二抗的加入量，且在反应完成后进行洗涤以除去结合了其它非特异性IgG酶标二抗。

此外，以上两种方法还存在共同的缺陷是，两者检测手段均为非均相反应体系，相较于均相反应体系，其选择性、灵敏性，及反应速度等均不及后者。

因此，为了克服现有检测技术中存在的上述缺陷，需要研究开发出一种抗原特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、免清洗、线性范围宽、操作简单、测试更稳定的用于检测anti-Carp Ab的均相免疫试剂盒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种检测目标抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用，该试剂盒采用竞争法反应模式，该反应模式能特异性检测出IgG、IgA、IgM等anti-Carp Ab，并省略传统间接法中需要洗涤的过程。其与传统间接法相比的既省时又免清洗，操作简便。

为此，本发明第一方面提供了一种用于检测目标抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂套装，其包括：

组分a，其包含能够与目标抗-Carp抗体和第二抗-Carp抗体特异性结合的抗原；