[发明专利]一种羊传染性脓疱病毒在制备抗结直肠癌细胞药物中的应用

说明书

本发明公开了一种羊传染性脓疱病毒在制备抗结直肠癌细胞药物中的应用，本发明的羊传染性脓疱ORFV病毒有效抑制结直肠癌肿瘤细胞生长中的应用。本发明涉及基因改造过的ORFV用做溶瘤病毒，对结肠癌细胞的生长和转移有很强的抑制作用，不参入宿主基因组，对人类安全性好，可以重复接种，潜在疗效好、成本低、毒性小。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种羊传染性脓疱病毒在制备抗结直肠癌细胞药物中的应用。

背景技术

羊传染性脓疱病毒(俗称羊口疮病毒，ORFV)属痘病毒科，副痘病毒属，是羊传染性脓疱病(羊口疮)的病原体。羊传染性脓疱病是一种局限性，高度传染性疾病，以在患羊口唇等处皮肤和黏膜形成丘疹、脓疮、溃疡和结成疣状厚痂为特征。羔羊最易患病，多为群发。由于病毒的抵抗力强，羊群一旦被感染则不易清除，可持续危害羊群多年，给养羊业造成极大的经济损失。ORFV病毒粒子呈砖形或椭圆形，其表面呈绳索样纵横交错排列结构。该病毒是一种高度嗜上皮样病毒，粘膜细胞如角质细胞等是ORFV在体内复制的重要场所。ORFV引发病灶的组织病理学特征包括角化细胞的空泡和肿胀，细胞间质变性，表皮增生显著,表皮内微肿胀，皮下组织中性粒细胞、树突状细胞(DCs)、T细胞和B细胞聚集，痂皮壳形成等。与其它痘病毒感染相比，ORFV感染具有3个特点：1)损伤局限在病毒侵入点附近；2)无病毒血症；3)病毒主要作用于角化细胞。这些特点使ORFV感染成为研究病毒与表皮间相互作用的一个很有吸引力的模型。同时也是细胞分化和调节研究的代表性病原。

ORFV被公认具有强大的宿主免疫调节功能。ORFV可快速介导机体的体液和适应性免疫反应。宿主感染羊传染性脓疱病毒后，固有免疫系统的多种细胞被激活并且诱导趋化因子和细胞因子的分泌，中性粒细胞、自然杀伤(NK)细胞和树突状细胞(DCs)在感染部位募集。在感染的早期阶段，ORFV主要诱导Th1型免疫应答，外周免疫细胞主要分泌IFNγ、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-12、IL-18等，继而出现Th2型免疫应答，主要分泌IL-4、IL-10、IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)。补体的调理作用和APC介导的抗原提呈是激活免疫反应的重要环节。灭活的ORFV可能是通过TLR依赖性和非依赖性途径来调节其免疫特性[7]。ORFV自身及其编码的部分蛋白具有很好的免疫调节功能。

溶瘤病毒是一类能特异性感染和杀伤肿瘤细胞的病毒。近几十年来，溶瘤病毒治疗引起了广泛关注，相关研究取得了巨大进展。目前研究最深入的溶瘤病毒包括腺病毒、I型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)、痘苗病毒等，它们特异性识别并感染肿瘤细胞，最终导致细胞溶胀而摧毁肿瘤细胞，但无法在正常机体细胞内复制而不具有杀伤作用，理论上具有更高的抗肿瘤效应和更低的副作用。溶瘤病毒具备靶向感染并杀伤肿瘤细胞的能力，基于不同病毒对肿瘤细胞的易感性存在差异，不同的病毒颗粒可作为纳米级药物用于不同肿瘤的治疗。选择性感染肿瘤细胞是病毒的固有属性，适当的改造病毒的衣壳结构可增强病毒对肿瘤细胞的易感性。通过插入或缺失特定基因改造病毒基因组使得病毒能够携带外源治疗分子进入肿瘤细胞从而杀伤肿瘤细胞，并且减弱其对正常细胞的影响。通过体内外试验研究携带增强免疫反应和或促凋亡等基因的溶瘤疫苗能够有效的杀伤肿瘤细胞。多种溶瘤病毒疫苗已经用于肿瘤治疗，其安全性和有效性也得到很好的鉴定。安进(Amgen)的Imlygic(talimogenelaherparepvec；T-VEC)是第一个被美国FDA批准的溶瘤病毒疗法。该药物是经过基因改造的HSV1，用于治疗病灶在皮肤和淋巴结，没能通过手术完全清除的黑色素瘤。

结直肠癌(Colorectal cancer)是现今世界上最常见的恶性肿瘤之一，侵袭和转移是导致患者死亡的主要原因。近年来，新型靶向药物的出现，如靶向EGFR的西妥单抗和帕尼单抗，靶向VEGF的贝伐单抗以及VEGF-trap抗体等，给晚期结直肠癌患者带来了明显的生存利益。然而靶向抗体也存在耐药等副作用，成本高，价格昂贵，使其在肿瘤患者中的应用受到很大限制。研发疗效好、成本低、毒性小的溶瘤病毒治疗方法是结直肠癌治疗的一个很好的研究方向。

ORFV具有的以下独特的生物学特性