[发明专利]检测抗环瓜氨酸肽抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种用于检测抗环瓜氨酸肽抗体的均相免疫检测试剂盒。该试剂盒基于双抗原夹心反应模式，采用高灵敏度和特异性的环瓜氨酸肽偶联载体蛋白作为抗原原料制成，其不仅能够检测出所有类型的抗瓜氨酸抗体，而且具有特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单、稳定性好和精密度高的优点。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种用于检测抗环瓜氨酸肽抗体均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。

背景技术

抗环瓜氨酸肽(Anticycliccitrullinated peptide antibodies，抗CCP)抗体是一种新型的血清标志物，临床检验实践表明，抗CCP抗体的滴度通常和疾病的活动度相关，70-80％患者在疾病很早期就在血清和滑膜液中检测出抗CCP抗体，此抗体具有高度的特异性和一定的预后价值。

目前研究用或商品化抗瓜氨酸抗体试剂盒均采用间接法检测，尤其是采用ELISA间接法检测。人体内抗瓜氨酸抗体类型既有IgG，还有IgA、IgM，使用传统间接法反应模式只能检测IgG类型的抗体。而采用ELISA间接法检测模式，不仅只能检测IgG类型的抗体，而且灵敏度较低，特异性也较差，操作也较为繁琐。

因此，目前亟需研究开发一种灵敏度高、特异性好、操作方法简便，且能够检测所有类型抗体的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于检测抗环瓜氨酸肽抗体的均相免疫检测试剂盒。该试剂盒不仅能够检测出所有类型的抗瓜氨酸抗体，而且具有特异性强、信号放大效果好、灵敏度高、线性范围宽、操作简单、稳定性好和精密度高的优点。

为此，本发明第一方面提供了一种制备用于检测抗环瓜氨酸肽抗体的均相免疫检测试剂盒的方法，其包括：

制备第一组合物，所述第一组合物包含组分a，所述组分a由能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗原构成，其中所述第一抗原能够与抗环瓜氨酸肽抗体的抗原表位第一识别位点特异性结合；

制备第二组合物，所述第二组合物包含组分b，所述组分b由能够与抗环瓜氨酸肽抗体的抗原表位第二识别位点特异性结合的第二抗原以及与之结合的特异性配对物中的一个成员构成；

制备第三组合物，所述第三组合物包含组分c，所述组分c由能够在激发状态产生单线态氧的供体以及与之结合的特异性配对物中的另一个成员构成。

本发明中，所述第一抗原和所述第二抗原相同或不同，二者独立地选自合成的含瓜氨酸的环型肽、含瓜氨酸的线型肽、由至少2个单一含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽、含有至少2个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物和瓜氨酸化蛋白。

在本发明的一些优选的实施例中，第一抗原和所述第二抗原分别独立地选自合成的含环瓜氨酸的环形肽、含瓜氨酸的线型肽、由至少2个单一含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽和含有至少2个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物。

在本发明的一些进一步优选的实施例中，所述第一抗原和所述第二抗原分别独立地为由2-4个含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽或含有2-4个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物；优选所述含瓜氨酸的肽段选自SEQ ID No.1-4。

在本发明的一些具体优选的实施例中，所述第一抗原通过中间体与受体相结合，所述中间体为亲水性高分子物质。

在本发明的一些实施例中，所述中间体为蛋白质，优选选自血蓝蛋白、卵清蛋白、牛血清白蛋白或牛甲状腺球蛋白。

在本发明的另一些实施例中，所述中间体选自树枝状大分子、聚羧酸酯、聚巯基和聚乙二醇。

在本发明的一些优选的实施例中，所述第二抗原与生物素结合，而所述供体与链霉亲和素结合。