[发明专利]一种均相人心肌肌钙蛋白I快速检测试剂盒、系统、检测方法与应用

说明书

本发明涉及一种人心肌肌钙蛋白I cTnI检测试剂盒的制备方法，包括制备包含受体以及与之结合的第一结合单元的组分，受体能与单线态氧反应生成可检测信号，第一结合单元能结合cTnI的第一表位；制备包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元的组分，第二结合单元能结合cTnI的第二表位，第二表位与第一表位是cTnI的不同结合特性的表位或不同位置的相同结合特性的表位；制备包含供体以及与之结合的第一标记物的特异结合物的组分，供体能够在激发状态产生单线态氧。该方法制备的试剂盒能够高效地检测人心肌肌钙蛋白I。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种均相免疫检测试剂盒及其制备方法、使用方法、检测系统及其在人心肌肌钙蛋白I检测中的用途。

背景技术

目前，生物大分子人心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测常用ELISA法、胶体金法等。免疫分析方法是利用抗原与抗体特异性结合而建立的高选择性生物化学方法。免疫分析根据标记与否分为标记免疫分析法和非标记免疫分析法。由于标记物的引入，不可避免地带来了结合的抗原-抗体与过量的抗原或抗体的分离问题，因而标记免疫分析法根据分离与否又分为均相免疫分析法和非均相免疫分析法。非均相免疫分析法需要包埋、洗脱、分离等多步操作，分析过程繁琐，分析时间长，不能满足快速检测和诊断的要求。均相法则有效避免了洗脱、分离等繁琐步骤，极大提高了分析效率和性价比，得到日益广泛的应用，具有取代传统非均相免疫分析的潜力。

非均相免疫分析是指抗体-抗原反应后、检测信号前，需要分离去除未参加反应的、游离状态的标记抗体或其他组分；此时，检测结合状态的结合标记物的信号强度，可通过数学函数可获得待测抗原或抗体的含量。分离结合标记物和游离标记物常用的方法是固相吸附分离技术。针对cTnI定量分析而言，将捕获抗体与固相载体连接，待检抗原分别与标记抗体和捕获抗体结合，于固相材料表面形成双抗体夹心复合物(结合标记物位于固相表面)，而过量的、未参与抗原抗体反应的游离标记抗体分布于液相中。去除液相溶液、并反复洗涤固相(微粒)，可有效去除游离状态标记抗体。固相吸附分离方法有两个重要环节：包被和洗涤。此种非均相反应模式因包被和洗涤环节的存在，给标记免疫分析造成很大缺陷，例如：操作步骤麻烦，检测范围较窄，检测的精密度较差，容易出现批间、批内差异。

尽管目前已经公开报道了一些非均相检测cTnI的方法，但是他们的共同特点是检测时间较长，消耗检测人员大量时间，且检测灵敏度也相对较低。

出于这种考虑，本发明的发明人进行了研究，期望提供一种快速均相检测cTnI的方法、试剂盒及其应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供了一种制备快速检测cTnI的均相免疫试剂盒的方法，由该方法获得的试剂盒能够快速检测待测样本中的cTnI，检测时间可缩短至10min以内，但同时检测灵敏度却能达到5pg/mL，还克服了“钩状效应”的缺陷。

本发明第一方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括：

制备第一组分，所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；

制备第二组分，所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；

制备第三组分，所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。

在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与人心肌肌钙蛋白I具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。