[发明专利]一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法

权利要求书

1.一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)获取藻油；

2)分离藻油磷脂：

将上述获得的藻油，加入食品级丙酮，充分混匀，45～60min后，4000～5000rpm/min离心15～20min，所得沉淀物为藻油磷脂粗品；重复此步骤；

3)磷脂酰胆碱的纯化：

利用硅胶色谱柱用乙醇洗脱色谱柱分离去除含磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸；然后再用乙醇洗脱色谱柱分离获得磷脂酰胆碱；

4)富含ω-3脂肪酸磷脂的合成：

将上述提取的藻油磷脂粗品或磷脂酰胆碱与乙醇混合，再加入脂肪酶和适量的水，利用脂肪酶醇解反应制备得到富含ω-3脂肪酸磷脂。

2.根据权利要求1所述的利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述步骤4)之后还包括以下步骤：

5)富含ω-3脂肪酸磷脂的提纯：

将所述步骤4)中获取的富含ω-3脂肪酸磷脂与食品级正己烷按1:10的体积比例混合提取3次，收集乙醇相，旋转蒸发去除乙醇和水后获得提纯后的富含ω-3脂肪酸磷脂。

3.根据权利要求1所述的利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述步骤1)之后还包括：

1a)脱色除臭；将所得的藻油加入占油体质量5％的活性白土进行脱色，脱色温度为80℃，脱色时间为45分钟，同时抽真空并适度搅拌，过滤除去白土，对油脂进行水蒸气气提除臭，汽提温度为85℃，真空度为0.30Kpa，脱臭时间为1小时，然后维持真空状态下缓慢冷却，离心得藻油成品。

4.根据权利要求1所述的利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述获取藻油的步骤包括：

1b)微藻干粉制备；

1c)藻油提取；

取微藻藻粉，以质量分数为60-100％乙醇作为萃取剂，利用加速溶剂萃取仪进行萃取，萃取液置于真空旋转蒸发器将有机溶解蒸发，蒸发后所得剩余物即为藻油。

5.根据权利要求4所述的一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述的萃取温度为55～120℃，萃取时间25～85min，萃取次数为2～5次；萃取结束后将萃取液置于真空旋转蒸发器将有机溶解蒸发，蒸发后所得剩余物即为藻油。

6.根据权利要求4所述的一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述的微藻包括裂殖壶藻、等鞭金藻、寇式隐甲藻、微绿球藻、绿色巴夫藻、布朗葡萄藻、三角褐指藻、菱形藻、小球藻、栅藻或者杜氏藻。

7.根据权利要求4所述的利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述微藻干粉制备的方法的步骤包括：

1d)选定微藻进行培养和发酵；所述培养和发酵为藻种培养和异养发酵，得到微藻原料；

1e)干燥；将步骤(1)得到的微藻原料进行干燥处理，得到微藻粉末；

1f)破壁预处理；将步骤(2)得到的微藻粉末采用超声处理法进行微藻破壁预处理，得到微藻干粉。

8.根据权利要求1～7任一项所述的一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述富含ω-3脂肪酸磷脂的合成中，反应条件为：藻油磷脂粗品或磷脂酰胆碱和乙醇的质量比1：1～4，脂肪酶的加入量占藻油磷脂粗品或磷脂酰胆碱质量的5～18％，加水量占藻油磷脂粗品或磷脂酰胆碱质量的0～15％，反应温度25～55℃，反应时间为12h～60h，搅拌速度300～600r/min。

9.根据权利要求1～7任一项所述的一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，所述步骤2)中藻油与丙酮的体积比藻油：丙酮为1：10。

10.根据权利要求7所述的一种利用藻油制备富含ω-3脂肪酸磷脂的方法，所述步骤1d)包含准备培养基以及异氧发酵的过程；

所述准备培养基包含,

步骤1d1)固体培养基：

培养基组成：葡萄糖30g，味精30g，酵母膏6g，氯化钠10g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁8g，无水氯化钙0.8g，碳酸氢钠0.4g，A5溶液1ml，土浸液2ml，纯净水1000ml；琼脂2％；

步骤1d2)一级种子培养基：

培养基组成：葡萄糖40g，味精35g，酵母膏6g，氯化钠8g，磷酸二氢钾5g，硫酸镁6g，无水氯化钙1g，碳酸氢钠0.5g，A5溶液1ml，土浸液2ml，纯净水1000ml；

步骤1d3)二级种子培养基：

培养基组成：培养基组成：葡萄糖50g，味精40g，酵母膏6g，氯化钠10g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁8g，无水氯化钙0.8g，碳酸氢钠0.3g，A5溶液1ml，土浸液2ml，纯净水1000ml；

步骤1d4)发酵培养基：

培养基组成：葡萄糖30g，味精30g，酵母膏6g，氯化钠10g，磷酸二氢钾4g，硫酸镁6g，无水氯化钙1g，碳酸氢钠0.4g，A5溶液1ml，土浸液2ml，纯净水1000ml；

步骤1d5)菌种保藏培养基：

所述固体培养基或发酵培养基中添加有青霉素，添加量为50～100mg/L，并低温保藏。