[发明专利]一种人乙型脑炎病毒抗体固相竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

本发明涉及一种医学检测用试剂盒，确切讲本发明是一种用于人乙型脑炎病毒抗体固相竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和检测方法。所述试剂盒包含有包被人乙型脑炎病毒灭活抗原的ELISA板，人乙型脑炎病毒的阳性血清、猴抗人乙型脑炎病毒的阳性对照血清和人阴性对照血清。采用本发明的试剂盒进行检测，可不分人种的检测感染人乙型脑炎病毒的患者血清，不仅可以高通量的检测临床患者血清样品，还可根据需要检测样品的抗体效价。同时，所提供的固相竞争ELISA试剂盒操作简单，易于掌握；不需高端仪器设备，易于推广；成本低，适于临床血清样品检测及实验室研究应用。

技术领域

本发明涉及一种医学检测用试剂盒，确切讲本发明是一种用于人乙型脑炎病毒抗体固相竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

人乙型脑炎病毒简称乙脑病毒，属于虫媒病毒黄病毒科黄病毒属。感染患者主要症状为持续高热、头痛、呕吐、昏睡、痉挛等。其中重症者可周身高烧、抽痉不止、脑水肿、呼吸或循环衰竭而死亡，部分患者愈后会留有后遗症。消除蚊虫聚集地，扑灭越冬蚊和新生成蚊是预防乙脑的关键。人体接种疫苗可提高对乙脑病毒感染的抵抗力，对预防乙脑也有良好效果。乙脑尚无特效治疗方法。早期及时诊疗，中西医结合处理，可大大提高治愈率，减少后遗症发生概率。

1935日本学者首先从因脑炎死亡病人的脑组织中分离到该病毒，故国际上又称日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)，所致疾病在日本称日本乙型脑炎(JBE)。1950年以来，中国对该病进行了大量病原学和流行病学研究，为了与甲型脑炎相区别，定名为流行性乙型脑炎，简称乙脑，是中国夏秋季流行的主要传染病之一，除新疆、西藏、青海外，全国各地均有病例发生，年发病人数2.5万，病死率10％，大约15％的患者留有不同程度的后遗症。

目前已报道的病原学检测技术主要有病毒分离、RT-PCR、巢式PCR、 RT-LAMP、SYBRGreen RT-PCR、Taqman RT-PCR和MGB RT-PCR等。病毒分离不仅对试验环境要求高，所需时间长。RT-PCR、巢式PCR和RT-LAMP需对后续结果进行处理，容易出现交叉污染及假阳性结果。SYBR Green RT-PCR、 Taqman RT-PCR和MGB RT-PCR在对引物和探针设计时，不仅对基因序列要求高，而且费用高，需要高端仪器，上述检测方法需要对操作人员进行严格培训后方能工作。

而用于该病抗体检测的ELISA方法操作简单，容易掌握，不需要高端精密的仪器设备，易于推广。目前针对人乙型脑炎病毒抗体检测的ELISA方法多为间接ELISA，此法只能针对特定的乙脑血清样品，且只能判断血清样品的阴阳性，没有检测抗体效价的标准，因此无法检测被检样品的抗体效价，也无法根据此结果判断感染或者所处感染时期及免疫接种后恢复情况。

发明内容

本发明的技术任务在于提供一种可克服现有技术不足，具有特异、敏感、快速、方便、廉价特点的用于检测人乙型脑炎病毒抗体的检测试剂盒；本发明的另一目的在于提供一种该检测试剂盒的制备方法和检测方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种人乙型脑炎病毒抗体固相竞争ELISA检测试剂盒，所述试剂盒内包含有包被人乙型脑炎病毒灭活抗原的ELISA板、猴抗人乙型脑炎病毒的阳性血清、人乙型脑炎病毒的阳性对照血清和人阴性对照血清。

优选地，所述ELISA板上包被的人乙型脑炎病毒灭活抗原是通过细胞传代培养获得的。

优选地，所述试剂盒内还含有用于洗涤和血清稀释的PBST溶液、TMB A 液、TMB B液和终止液。

制备所述的一种人乙型脑炎病毒抗体固相竞争ELISA检测试剂盒的方法，包括以下步骤：

(1)通过细胞传代培养获得人乙型脑炎病毒灭活抗原；