[发明专利]一种低值鱼抗氧化肽的分离纯化方法

说明书

本发明属于海洋化学领域，具体涉及一种低值鱼抗氧化肽的分离纯化方法及分离获得低值鱼抗氧化肽。将经蛋白酶酶解的低值鱼酶解液依次经不同分子量超滤膜进行超滤、凝胶色谱层析和高效液相色谱层析分离纯化，所得组分即为含低值鱼抗氧化肽组分；其中，各步处理后均测定各个组分的抗氧化活性,将抗氧化活性最高的组分进行下一步的处理。本发明提供了一种系统的准确的分离纯化低值鱼抗氧化肽的技术，获得了氨基酸序列明确的低值鱼抗氧化肽，且与初始酶解液相比，目标肽段的抗氧化活性显著提高。

技术领域

本发明属于海洋化学领域，具体涉及一种低值鱼抗氧化肽的分离纯化方法及分离获得低值鱼抗氧化肽。

背景技术

随着捕捞业技术的发展和国际竞争水平的增加，致使鱼类大量消耗，进而造成全世界大部分可利用鱼类的过度开发和消亡。此外，随着人口增加和人类倾向于对健康有益的海产品的消费观念的提升，增加了对鱼类和水产品的供求。然而在目标鱼种被过度开发利用的同时，很多没有商业价值的非目标鱼种，即低值鱼的加工仍没有得到很好的开发和利用，大部分作为动物饲料和肥料，或者废弃物丢弃，而这些鱼类资源原本可以通过配方和深加工，变为一系列高附加值的海产品。因此，实现低值鱼的高值化利用是目前亟待解决的问题。

海洋生物活性肽是近几年来的研究重点，能够潜在的影响人类健康和降低疾病风险，已引起了广泛的关注。海洋生物活性肽因为其结构特性、氨基酸组成和序列不同，而具有广泛的生物活性，包括抗氧化活性，抗高血压活性，抗菌活性，抗炎活性和抗血栓活性等，其中抗氧化活性因其与人类疾病和衰老密切相关而得到广泛关注。寻找天然安全的抗氧化剂，以更好的应用于食品工业和医药领域显得尤为迫切。

此外，海洋生物活性肽的活性与其氨基酸组成和序列结构密切相关，因此，探讨海洋生物活性肽的分离和纯化显得尤为重要。本专利旨在分离纯化低值鱼抗氧化肽，确定其氨基酸序列，这对于低值鱼的高值化利用是非常有意义的。

发明内容

本发明的目的是提供一种低值鱼抗氧化肽的分离纯化方法及分离获得低值鱼抗氧化肽。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种低值鱼抗氧化肽的分离纯化方法，将经蛋白酶酶解的低值鱼酶解液依次经不同分子量超滤膜进行超滤、凝胶色谱层析和高效液相色谱层析分离纯化，所得组分即为含低值鱼抗氧化肽组分；其中，各步处理后均测定各个组分的抗氧化活性,将抗氧化活性最高的组分进行下一步的处理。

进一步的说

1)将经蛋白酶解的低值鱼酶解液，经1000Da－10000Da不同分子量超滤膜进行超滤，得到不同截留分子量的酶解液，对获得的酶液进行抗氧化活性的测定，将抗氧化活性最高的组分经凝胶色谱层析柱分离，以双蒸水作为洗脱液，流速为0.3mL/min－0.6mL/min，收集各洗脱峰，并经紫外检测器检测220nm和280nm处各样品的出峰，再经抗氧化活性检测，确定抗氧化活性最高的洗脱峰，待用；

2)将上述层析处理后抗氧化活性最高的洗脱峰经高效液相色谱层析分离纯化，以5％－40％乙腈进行梯度洗脱，流速为5mL/min－10mL/min，收集洗脱峰，并经紫外检测器检测220nm和280nmnm处各样品出峰，再经抗氧化活性的检测，确定抗氧化活性最高组分即为低值鱼抗氧化肽。

所述抗氧化活性的测定可通过羟自由基清除能力测定，DPPH自由基清除能力测定，超氧自由基清除能力测定，还原能力测定，以及细胞抗氧化活性测定等等。

所述低值鱼为鲐鱼，鲱鱼，鳀鱼，鳟鱼，沙丁鱼等价格低廉且未被充分利用的小型鱼类。

所述低值鱼为鲐鱼时，经分离获得高活性高纯度的低值鱼活性肽的氨基酸序列为：七肽LDIQKEV或八肽TAAIVNTA。

一种高抗氧化活性的低值鱼活性肽，鲐鱼高抗氧化性活性肽为LDIQKEV或TAAIVNTA。