[发明专利]一种靶向性T淋巴细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向性T淋巴细胞，包括靶向CD33的嵌合抗原受体CAR‑CD33和/或靶向CD123的嵌合抗原受体CAR‑CD123，对肿瘤细胞的靶向识别性广且强，可避免肿瘤细胞出现靶点逃逸，高效且特异性地杀伤肿瘤细胞，扩大了其广谱杀伤性。本发明还提供了该靶向性T淋巴细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向性T淋巴细胞及其制备方法和应用。

背景技术

白血病是造血系统的一种恶性疾病，按病变细胞系列可分为淋巴细胞白血病、髓系白血病、混合细胞白血病，在我国各年龄组恶性肿瘤的死亡率中较高，尤其是急性髓系白血病(AML)是最常见的、死亡率最高的一类白血病。CAR-T(嵌合抗原受体T细胞)技术是一种新型免疫细胞疗法，它是将经过CAR改造的T细胞回输至人体，激活自身免疫系统，对肿瘤细胞进行杀伤，以达到清除恶性肿瘤细胞的目的。

虽然CAR-T技术在白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统肿瘤中取得了显著的疗效，但是在复杂的肿瘤微环境中(例如多种肿瘤抗原同时出现)，其对肿瘤细胞的识别、杀伤能力大大降低，限制了其临床应用。因此，有必要提供对肿瘤细胞靶向性较强的CAR-T技术，以用于白血病等恶性肿瘤的治疗中。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种针对髓系白血病的靶向性T淋巴细胞及其制备方法和应用。该T淋巴细胞可靶向至髓系白血病细胞的两个肿瘤靶点，对肿瘤细胞的靶向性高、识别性较广且强，可避免肿瘤细胞出现靶点逃逸，扩大了该T细胞的广谱杀伤性。

第一方面，本发明提供了一种靶向性T淋巴细胞，包括靶向CD33的嵌合抗原受体CAR-CD33和/或靶向CD123的嵌合抗原受体CAR-CD123，其中，所述CAR-CD33包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD33的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-CD123包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD123的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；其中，所述靶向CD33的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD123的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

优选地，所述靶向性T淋巴细胞，可以为带CAR-CD33和CAR-CD123的双靶点嵌合抗原受体T细胞(即，靶向CD33和CD123的双靶点嵌合抗原受体T细胞)，也可以为带CAR-CD33的嵌合抗原受体T细胞和带CAR-CD123的嵌合抗原受体T细胞的混合，或者为带CAR-CD33和CAR-CD123的双靶点嵌合抗原受体T细胞、带CAR-CD33的嵌合抗原受体T细胞和带CAR-CD123的嵌合抗原受体T细胞这三种的混合。

此时，所述靶向性T淋巴细胞，既可以识别表面表达有CD33抗原蛋白的肿瘤细胞，也可以识别表面表达有CD123抗原蛋白的肿瘤细胞，当然对同时有CD33抗原蛋白和CD123抗原蛋白的肿瘤细胞的识别性也较好，能够有效避免肿瘤细胞出现CD33免疫逃逸的发生。

其中，当所述靶向性T淋巴细胞为带CAR-CD33和CAR-CD123的双靶点CAR-T时，嵌合抗原受体CAR-CD33和CAR-CD123的分布位置不作限定，可以是交替分布(例如ABAB…，AABABB…)或依次分布(例如AAAA…BBB…)，但两者之间并无共价连接，此时它们相应的CD33单链抗体和CD123单链抗体之间也并无共价连接，这样可使它们保持较好的识别能力。

上述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向CD33的单链抗体或所述靶向CD123的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。