[发明专利]一种靶向性抗肿瘤T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向性抗肿瘤T细胞，包括靶向EGFRvIII的嵌合抗原受体CAR‑EGFRvIII和/或靶向HER2的嵌合抗原受体CAR‑HER2，其中，所述CAR‑EGFRvIII包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向EGFRvIII的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR‑HER2包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向HER2的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列。该靶向性抗肿瘤T细胞可以精准高效地杀伤表面EGFRvIII和/或HER2阳性抗原的肿瘤细胞，有效克服肿瘤细胞的免疫逃逸。本发明还提供了该靶向性抗肿瘤T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向性抗肿瘤T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

神经胶质瘤简称胶质瘤，是中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)最常见的恶性肿瘤，起源于神经胶质细胞。胶质瘤是一种侵袭性强、复发率高的肿瘤，由于其浸润性生长，手术治疗很难全部切除肿瘤细胞，即使辅于放疗、化疗等，仍然难免复发。

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric Antigen Receptor T-CellImmunotherapy，CAR-T)技术是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势弥补了传统疗法的弊端，在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，并在白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等血液系统肿瘤中取得了卓越的临床疗效。但是，CAR-T技术目前的应用还局限于血液瘤，在胶质瘤等肿瘤细胞的应用还未有相关研究；同时，CAR-T技术应用过程中时常出现肿瘤细胞上靶位肿瘤抗原的丢失、细胞内吞、变异，导致CAR-T细胞无法识别和激活。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向性抗肿瘤T细胞及其制备方法和应用，本发明提供的靶向性抗肿瘤T细胞，既可以有效识别表面表达有EGFRvIII(表皮生长因子受体III型突变体)抗原蛋白的肿瘤细胞又可以有效识别表面表达有HER2(人上皮生长因子受体2)抗原蛋白的肿瘤细胞，并激活T细胞的免疫作用对EGFRvIII和HER2阳性肿瘤细胞进行杀伤，具有持久细胞活力和杀伤力，有效克服所靶向的肿瘤细胞表面EGFRvIII抗原蛋白或HER2抗原蛋白出现丢失、细胞内吞、变异等所引起的免疫逃逸；此外，所述靶向性抗肿瘤T细胞对正常细胞不会造成损伤。

第一方面，本发明提供了一种靶向性抗肿瘤T细胞，包括靶向EGFRvIII的嵌合抗原受体CAR-EGFRvIII和/或靶向HER2的嵌合抗原受体CAR-HER2，其中，所述CAR-EGFRvIII包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向EGFRvIII的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，所述CAR-HER2包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向HER2的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列；其中，所述靶向EGFRvIII的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向HER2的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

本发明所述靶向性抗肿瘤T细胞的特异性靶点包括表皮生长因子受体III型突变体(epidermal growth factor receptor variant III，EGFRvIII)和人上皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER2)。其中，所述EGFRvIII是表皮生长因子受体(EGFR)的最常见突变体，在脑胶质瘤、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤中表达率很高，很多研究表明，EGFRvIII一般在肿瘤细胞中出现，在正常人细胞中几乎不表达。HER2同样是在胶质瘤、乳腺癌等多种肿瘤细胞中高表达，且对肿瘤的发生和转移发挥着重要作用的表皮生长因子受体家族分子；研究表明，HER2在正常人的中枢神经系统中不表达，但是在脑胶质瘤中，胶质瘤细胞表面的HER2过表达与其恶性表型密切相关，因此，它可以成为人胶质瘤治疗的特异性靶点。