[发明专利]一种培育水稻抗稻瘟病两系不育系的方法

权利要求书

1.一种培育水稻抗稻瘟病两系不育系的方法，其特征在于：

所述方法依次包括以下步骤：

一、先以水稻光温敏核不育系广占63-4S为母本、带有抗稻瘟病基因Pi1和Pi2的GD-7为父本，两者杂交得到F₁，再种植F₁后与广占63-4S回交获得BC₁F₁；

二、先种植BC₁F₁种子以获得BC₁F₁群体，然后在BC₁F₁群体中利用分子标记辅助选择带有Pi1和Pi2基因标记的可育单株与广占63-4S回交得到BC₂F₁；

三、先种植BC₂F₁种子以获得BC₂F₁群体，然后在BC₂F₁群体中利用分子标记辅助选择带有Pi1和Pi2基因标记的单株，收获BC₂F₂种子；

四、先种植BC₂F₂种子以获得BC₂F₂群体，再结合分子标记辅助选择、育性鉴定以及农艺性状考察选择带有Pi1和Pi2基因纯合标记的不育单株，保留其稻蔸，并在可育环境条件下繁种，收获BC₂F₃种子；

五、先种植BC₂F₃种子以获得BC₂F₃株系，然后通过农艺性状考察和育性鉴定，选择优良的不育单株，保留其稻蔸，并在可育环境条件下繁种，获得BC₂F₄种子；

六、先种植BC₂F₄种子获得BC₂F₄株系，按照步骤五所述方法繁殖获得BC₂F₅种子，再种植BC₂F₅种子以获得BC₂F₅株系，然后对BC₂F₅株系经Pi1和Pi2基因标记验证纯合，并通过人工冷水池处理选择育性转换起点温度低于23.5℃的株系，繁殖选中株系得到的自交种子即为培育得到的水稻抗稻瘟病两系不育系，其中，所述人工冷水池处理具体为：先在水稻幼穗分化第4～7期将植株从大田挖出，盆栽后置于自然状态下至植株活蔸，再将盆栽活蔸的单株放入冷水池中，灌入冷水处理6～8天后移至自然状态下生长，然后选择剑叶与倒二叶叶枕距在±2cm内的单穗，待抽穗后镜检，其中，所述处理期间水温设置为：开机温度23.1℃，停机温度22.8℃。

2.根据权利要求1所述的一种培育水稻抗稻瘟病两系不育系的方法，其特征在于：

步骤四中，所述育性鉴定具体为：先用I₂-KI溶液对取自稻穗的花粉进行染色，再通过观察花粉染色情况和形状选择不育花粉率不低于99.5%的单株，其中，不育花粉率=不育花粉数/总花粉数*100%，不育花粉数为染色后出现典败或圆败现象的花粉数量。

3.根据权利要求1或2所述的一种培育水稻抗稻瘟病两系不育系的方法，其特征在于：

所述分子标记辅助选择中，

Pi1基因分子检测的引物为：

F:ATTGCTGCAAAGTGGGAGAC

R:AAGTGGAGGCAGTTCACCAC；

Pi2基因分子检测的引物为：

F:GTGCATGAGTCCAGCTCAAA

R:GTGTACTCCCATGGCTGCTC。