[发明专利]FAD2性能基因座及相应的能够诱导靶向断裂的靶位点特异性结合蛋白

权利要求书

1.一种适用于修饰大豆细胞中的FAD2基因的锌指核酸酶，其中该锌指核酸酶在选自SEQ ID NO:14至SEQ ID NO:20的核酸靶位点处或所述核酸靶位点附近切割，其中所述FAD2基因是如SEQ ID NO:4所表示的FAD2.3基因、如SEQ ID NO:9所表示的FAD2.6基因、或前述二者，所述锌指核酸酶包含锌指核酸酶对，该对中的每个锌指核酸酶包含核酸酶结构域和位点特异性锌指蛋白，所述位点特异性锌指蛋白在SEQ ID NO:14-SEQ ID NO:20内结合，其中第一和第二锌指蛋白各自包括5个或6个锌指结构域，依次为F1至F5或F1至F6，每个锌指结构域包括识别螺旋区，其中该锌指蛋白包括在下表的单一行中排序并显示的识别螺旋区：

2.如权利要求1所述的锌指核酸酶，其中所述锌指核酸酶对包括：

(i)ZFP#37354和ZFP#37355；

(ii)ZFP#37370和ZFP#37371；

(iii)ZFP#37374和ZFP#37375；

(iv)ZFP#37366和ZFP#37367；

(v)ZFP#37384和ZFP#37385；

(vi)ZFP#37398和ZFP#37399；或

(vii)ZFP#37392和ZFP#37393。

3.一种多核苷酸，其编码如权利要求1或2所述的锌指核酸酶。

4.一种在大豆细胞中切割FAD基因的方法，该方法包括：

将如权利要求1-2中任一项所述的锌指核酸酶或如权利要求3所述的多核苷酸导入大豆细胞，从而切割所述FAD2基因。

5.如权利要求4所述的方法，进一步包括将感兴趣的外源核酸序列整合到经切割的FAD2基因中。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述感兴趣的外源核酸序列是非编码序列。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述外源序列选自下组：包含DNA结合结构域结合靶位点的序列，一个或多个杀虫抗性基因，一个或多个除草剂抗性基因，一个或多个氮使用效率基因，一个或多个水使用效率基因，一个或多个营养品质基因，一个或多个可选择标志物基因，及其组合。

8.如权利要求4-6中任一项所述的方法，其中所述FAD2基因是FAD22.3、FAD2 2.6基因、或前述二者。

9.如权利要求4-7中任一项所述的方法，其中位点特异性方式的切割对于FAD2 2.3和FAD2 2.6的一些但非全部拷贝是特异性的。