[发明专利]基于POCT模式的HLA-B*5801基因型快速检测试剂盒

说明书

本发明提供一种基于POCT模式的HLA‑B*5801基因型快速检测试剂盒，所述试剂盒至少含有用于检测HLA‑B*5801(rs9263726)基因型的荧光定量PCR引物和探针(SEQ ID NO:1‑4)及细胞裂解液，此外还可包括dNTPs、DNA聚合酶、Mg²⁺、反应缓冲液、标准阳性模板、采样棒、样品收集管等。本试剂盒可实现即时检测，无需DNA提纯，可将样本直接加入试剂中进行PCR反应，特别适合DNA含量较低样本(如口腔脱落细胞)的快速、准确检测，检测准确率达99％以上，检测灵敏度高，可准确检测低至0.125ng基因组DNA；整个检测耗时短，1小时内可得检测结果，能在第一时间给医生提供用药依据，降低患者用药风险。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种基于POCT模式的HLA-B*5801基因型快速检测试剂盒。

背景技术

人类白细胞抗原HLA是一组位于第6号染色体上的基因，是人类最复杂的遗传多态性系统，其多态性分布存在明显的族群特征。

别嘌呤醇可抑制尿酸生成，也是最常引起皮肤不良反应的药物之一。据统计，约2％服用别嘌呤醇的患者在临床上出现轻重不一的皮肤过敏反应，虽然不足1％的病例会转变为药物高敏综合征、Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮坏死松解症在内的严重皮肤不良反应，但其死亡率高达10％-40％。

研究发现，具有遗传特异性的药物毒副作用常与人类白细胞抗原基因密切相关。HLA-B*5801(rs9263726)基因和高血次黄嘌呤浓度均为别嘌呤醇特异性T淋巴细胞反应的影响因素。由于，HLA-B基因是人类基因组中最具多形性的基因，不同的等位基因编码的HLA-B分子可能对别嘌呤醇的亲和力不同，而高亲和力的HLA-B分子更易与别嘌呤醇结合从而引起过敏反应。

中国汉族人群属于携带HLA-B*5801等位基因频率较高的人群，其中南方汉族人群携带HLA-B*5801等位基因概率为8.35％，北方汉族人群携带HLA-B*5801等位基因概率为5.53％。2008年，中国台湾地方行政部门就已经发布指令，在服用别嘌醇前必须进行HLA-B*5801检测；美国风湿病学会在2012年的痛风诊治指南中也建议亚裔人群在服用别嘌醇前检测HLA-B*5801基因。因此，快速、准确的HLA-B基因分型检测对服用别嘌呤患者的个体化用药有着重大的临床意义。

目前，国内外对HLA-B*5801等位基因进行分析检测的方法主要有聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)，测序法和荧光定量PCR法。测序法对检测结果具有很高的精度，其依赖大型精密仪器设备、固定实验室以及专业操作人员，因此，这种检测方法成本高，步骤繁琐并且耗时长，在临床上很难进行推广。PCR-SSCP法是一种较经典的方法，通过几对HLA-B*5801特异性引物扩增DNA并通过电泳结果来分析，该方法污染风险大、检测周期长，也不适合临床使用。CN103805701A公开了一种荧光定量PCR检测方法。虽然该方法具有成本低，时间短和结果分析简单的优点，但是由于该反应体系只能扩增纯化后的基因组DNA样本，必须采用多步骤多管操作，在临床推广上也不理想。因此这些常规的检测技术都难以满足国内携带HLA-B*5801突变基因的人群对HLA-B*5801基因检测快速、准确的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一套用于检测HLA-B*5801(rs9263726)基因型的荧光定量PCR引物和探针。

本发明的另一目的是提供一种基于POCT模式的HLA-B*5801(rs9263726)基因型快速检测试剂盒。

为了实现本发明目的，本发明提供一套用于检测HLA-B*5801(rs9263726)基因型的荧光定量PCR引物和探针，包括上游引物、下游引物、野生型探针和突变型探针，它们的核苷酸序列分别如下(SEQ ID NO:1-4)：

上游引物：5’-GTGGGTTACACCTTGGCCC-3’