[发明专利]马铃薯植株叶斑类病害茄链格孢病原菌的分子检测引物及其检测方法

说明书

马铃薯植株叶斑类病害茄链格孢病原菌的分子检测引物及其检测方法，它涉及马铃薯检测领域，本发明为了解决目前传统生物学方法针对马铃薯，很难在种间区分链格孢属各种的问题，本发明的引物序列如序列表Seq ID No：1所示和Seq ID No：2所示，利用上述引物对待测样品进行PCR检测，本发明的方法能够快速，准确的鉴定茄链格孢菌(Alternaria solani)，检测灵敏度为10pg/μL。

技术领域

本发明涉及马铃薯检测领域，具体为马铃薯植株叶斑类病害链格孢属(茄链格孢菌(Alternaria solani))病原菌的分子检测引物及其检测方法。

背景技术

当前中国马铃薯的总面积和总产量跃居世界首位，但单产却处于较低水平，各种病害频发是造成马铃薯减产的主要原因之一。马铃薯病害中，以真菌病害种类最多，且具有传播性，防控难，有的真菌还可发生变异，对马铃薯生产造成严重威胁。Alternaria是造成马铃薯植株和叶片病斑的一类重要真菌病原。据Zheng等(2015)报道，侵染中国马铃薯植株的Alternaria属病原主要有三种：茄链格孢(Alternaria solani)、链格孢(Alternariaalternata)和细极链格孢(Alternaria tenuissima)，这三种病原分别造成了马铃薯早疫病、黑点病和黑斑病，均可导致植株叶片坏死、植株枯萎等症状，严重时也可侵染块茎，从而造成减产。黑龙江省作为全国重要的马铃薯生产基地，Alternaria属病原在马铃薯植株上的种类分布情况还鲜为报道，调查近年来黑龙江省马铃薯Alternaria属病原的种类，对于有针对性地防治Alternaria属病原造成的各类病害具有重要意义。

许多链格孢属的不同小种都已经被分类，并表现出在种内或种间的生理、形态、基因和毒力变化。这可能是由于真菌菌丝体相互连接的桥梁作用可以促进营养、水分和信号分子的相互传输。许多像毒力分析、营养体亲和性和分子生化分析的实验方法都用来检验链格孢属种间和种内的变化，详细调查生长季节内链格孢属种间、种内变化可以让我们更好地了解不同年份间流行病学和管理病原。马铃薯早疫病、黑点病和黑斑病这三种病害在植株上的症状极其相似，在叶片上都可形成病斑，斑点形状和颜色也非常类似，在田间这三种病原通常情况下为混合侵染，因此通过目测其症状很难判定这三种病害，此外，由于许多链格孢属小种在显微镜下形态差异较小，所以传统生物学方法很难在种间区分链格孢属各小种。

发明内容

本发明为了解决目前传统生物学方法针对马铃薯，很难在种间区分链格孢属各种的问题，尤其是区分茄链格孢(Alternaria solani)的问题。而提供了马铃薯植株叶斑类病害茄链格孢病原菌的分子检测引物及其检测方法。

本发明的引物序列如序列表Seq ID No：1所示和Seq ID No：2所示。

本发明的马铃薯植株叶斑类病害茄链格孢病原菌的分子检测方法，它是按照以下步骤进行的：

一、以提取待检测的马铃薯基因组DNA为模板，采用权利要求1的引物，进行PCR扩增；

二、取PCR产物进行凝胶电泳检测，若能够检测出270bp大小的片段，则可判断出所检测的马铃薯中存在茄链格孢病原菌。

本发明包含以下有以效果：

本发明利用设计的根据链格孢属核糖体内转录间隔区ITSⅠ基因序列和组蛋白3(Histone3)基因保守序列设计的Alternaria属(尤其是茄链格孢菌(Alternaria solani))引物进行PCR扩增，建立了一套快速、准确的可鉴定Alternaria属病原的PCR鉴定技术，结合传统生物学鉴定方法，调查分析黑龙江省马铃薯叶斑类病害Alternaria属病原的组成和分布情况，以期为生产上有针对性地防治该类病害提供依据。

本发明的方法能够快速，准确的鉴定茄链格孢菌(Alternaria solani)，检测灵敏度为10pg/μL。

附图说明