[发明专利]一种用于普鲁兰酶高效表达和高密度培养的枯草芽孢杆菌在审
| 申请号： | 201810155533.5 | 申请日： | 2018-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN108102997A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;张康;宿玲恰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N9/44;C12P21/00;C12P19/04;C12P7/06;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 普鲁兰酶 枯草芽孢杆菌 高密度培养 高效表达 筛选 酶活 枯草芽孢杆菌菌株 生物工程技术领域 编辑系统 表达质粒 宿主菌株 感受态 罐发酵 重组菌 基因 敲除 上罐 摇瓶 制备 转化 | ||
1.一种适用于高密度培养的枯草芽孢杆菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌为出发菌株，敲除nprB、bpr、mpr、vpr、epr或wprA中至少一个基因。
2.根据权利要求1所述的适用于高密度培养的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述出发菌株为枯草芽孢杆菌WS5，已于2016年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016536，保藏地址为中国武汉武汉大学。
3.根据权利要求1所述的适用于高密度培养的枯草芽孢杆菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌WS5为出发菌株，敲除nprB、bpr、mpr、vpr、epr或wprA基因。
4.一种高效生产普鲁兰酶的基因工程菌，其特征在于，是在权利要求3所述的适用于高密度培养的枯草芽孢杆菌中表达普鲁兰酶基因。
5.一种普鲁兰酶的生产方法，其特征在于，将权利要求4所述的基因工程菌接种至发酵培养基里，于33～37℃培养。
6.一种普鲁兰酶的高密度发酵方法，其特征在于，将权利要求4所述的基因工程菌接种至发酵培养基中，控制pH 6.5-7.0，培养温度33-37℃，先将溶氧维持在28～32％，发酵直至溶氧迅速上升，流加葡萄糖，当普鲁兰酶酶活下降时结束发酵。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌在接种至发酵培养基前经过活化，所述活化是在含有4～6g/L酵母粉，10～15g/L蛋白胨，3～8g/L甘油，10～15g/LK
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将基因工程菌接种至种子培养基中，35～37℃，培养10～16h，转接至发酵培养基中，控制pH 6.5-7.0，培养温度33-37℃，通过与搅拌转速偶联和调节通气量将溶氧维持在28～32％，当溶氧迅速上升，开始流加浓度为400～500g/L的葡萄糖补料液，当普鲁兰酶酶活下降时结束培养。
9.权利要求1-3任一所述的适用于高密度培养的枯草芽孢杆菌在制备胞外蛋白中的应用。
10.权利要求4所述的基因工程菌在制备酒精燃料、抗性淀粉或麦芽三糖浆方面的应用。
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