[发明专利]制备用于检测过氧化氢的探针的方法

说明书

本发明涉及制备用于检测过氧化氢的探针的方法。本发明方法所合成的探针可以与过氧化氢作用，且具有高灵敏性和选择性的特点，可在过氧化氢高灵敏性和高选择性的识别中应用，或者其可测定样品中过氧化氢的浓度。

技术领域

本发明涉及制备用于检测过氧化氢的荧光探针的方法。本发明所制备的探针可以与过氧化氢作用，且具有高灵敏性和选择性的特点，可在过氧化氢高灵敏性和高选择性的识别中应用，或者其可测定样品中过氧化氢的浓度。。

背景技术

生物体在进行呼吸代谢的过程中会产生H₂O₂，过氧化氢基团俗称“自由基”，由“过氧化氢酶”催化生物体内蛋白质基团生成的。体内的过氧化氢是由过氧化氢基团水解产生的。

这种物质有比较高的氧化性，会伤害细胞中的正常生物大分子如蛋白质和DNA等。过氧化氢酶，是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内，可以将H₂O₂催化分解成H₂O和O₂，对人体无害。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。这是因为肝脏是人体中最大的化工厂，是动物体内最大的解毒器官，要进行大量的分解合成代谢，产生H₂O₂的速度很快，过氧化氢是一种代谢过程中产生的废物，它能够对机体造成损害。为了避免这种损害，过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质。过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H₂O₂分解为H₂O与O₂。所以需要高浓度过氧化氢酶工作保护肝细胞。过氧化氢作为氧化应激的一个典型标志，其平衡对生理和病理有重要影响。细胞内过氧化氢的含量变化和许多疾病的发生具有直接的关系，比如，癌症、糖尿病、心血管疾病、神经萎缩性疾病等。

因此，发展一种能够有效的定量测定生物体内的过氧化氢生物分子的含量的方法是必要的。在众多的测定技术中，荧光探针由于其独特的优点而受到广泛关注，包括高灵敏度、特异选择性以及实时原位成像分析等优点，因此设计并合成一个能够快速定量检测生物体内的过氧化氢分子的荧光探针对于学术研究和临床应用来说都是有价值的。

目前，定量检测过氧化氢的方法有很多，主要包括：滴定、荧光分析法、化学发光法、比色定量分析法、发射光谱分析法、电化学方法、离子色谱法等。比起其他的方法，荧光探针有着其内在的优势，包括高灵敏度，特异性，实施简单，响应快速能实现实时检测，能应用于生物成像等。而在检测过氧化氢的荧光探针方面，荧光增强探针很多，但是比率探针非常少，比率探针与荧光增强探针相比因可以通过两个峰之间的比值来消除环境对探针检测的影响，所以有更大的应用价值。因此，发展一个有较大移动波长且能在生理条件下检测过氧化氢的荧光探针是非常有必要的。

发明内容

本领域急需一种制备高灵敏性和高选择性测定过氧化氢的探针的方法，从而能够有效检测特别是能够在样本中检测过氧化氢。为此，本发明提出了一种新颖的合成检测过氧化氢的探针的方法，其所合成探针可直接使用，不需要做进一步有机合成修饰，并能够高灵敏和高选择性识别过氧化氢。本发明所制备的探针可对过氧化氢的进行高灵敏性和高选择性测定。

具体而言，本发明提供了探针的制备方法，其制备方式如下：

其中：R₁，R₂，R₃，R₄，R₅和R₆为独立地选自由氢原子、直链或支链烷基、直链或支链烷氧基、磺酸基、酯基和羟基组成的组；且其中的R₁，R₂，R₃，R₄，R₅和R₆可以相同或不同。