[发明专利]基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的引物组，其特征在于，包括分别针对如SEQ ID NO.1所示FAM19A4扩增子、如SEQ ID NO.2所示miR124-2扩增子、如SEQ IDNO.3所示C13ORF18扩增子、如SEQ ID NO.4所示EPB41L3扩增子、如SEQ ID NO.5所示JAM3扩增子、如SEQ ID NO.6所示SST扩增子、如SEQ ID NO.7所示ZIC1扩增子、如SEQ ID NO.8所示GHSR扩增子、如SEQ ID NO.9所示GFRA1扩增子及如SEQ ID NO.10所示ANKRD18CP扩增子的引物组合，其中：

FAM19A4上游引物：如SEQ ID NO.11所示，

FAM19A4下游引物：如SEQ ID NO.12所示，

miR124-2上游引物：如SEQ ID NO.13所示，

miR124-2下游引物：如SEQ ID NO.14所示，

C13ORF18上游引物：如SEQ ID NO.15所示，

C13ORF18下游引物：如SEQ ID NO.16所示，

EPB41L3上游引物：如SEQ ID NO.17所示，

EPB41L3下游引物：如SEQ ID NO.18所示，

JAM3上游引物：如SEQ ID NO.19所示，

JAM3下游引物：如SEQ ID NO.20所示，

SST上游引物：如SEQ ID NO.21所示，

SST下游引物：如SEQ ID NO.22所示，

ZIC1上游引物：如SEQ ID NO.23所示，

ZIC1下游引物：如SEQ ID NO.24所示，

GHSR上游引物：如SEQ ID NO.25所示，

GHSR下游引物：如SEQ ID NO.26所示，

GFRA1上游引物：如SEQ ID NO.27所示，

GFRA1下游引物：如SEQ ID NO.28所示，

ANKRD18CP上游引物：如SEQ ID NO.29所示，

ANKRD18CP下游引物：如SEQ ID NO.30所示。

2.一种基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，包括含有如权利要求1所述的上游引物及下游引物的PCR多重扩增反应液，所述PCR多重扩增反应液包括：AmpliSeq HiFi Mix、如权利要求1所述的SEQ ID NO.11-30引物依次等比混合组成的AmpliSeq Primer Pool及无核酸酶水。

3.根据权利要求2所述的基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述PCR多重扩增反应液的终成分为：2×AmpliSeq HiFi Mix 10μl、AmpliSeqPrimer Pool 2μl、目标基因组DNA 40ng-70ng、其余无核酸酶水补足至20μl；其中AmpliSeqPrimer Pool为SEQ ID NO.11-30引物依次按摩尔比1:1:2:2:1:1:4:4:2:2:1:1:2:2:4:4:2:2:2:2混合组成。

4.根据权利要求2-3中任一所述的基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照品及阴性对照品，所述阳性对照品为宫颈癌细胞株CaSki，所述阴性对照品为宫颈癌细胞株C33A。

5.一种基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：取待检测样本抽提的DNA，对其进行转化处理，转化后的DNA作为PCR的模板；

步骤二：提供如权利要求4所述的试剂盒，对所述模板进行PCR多重扩增，并在扩增产物两端接上合适的接头，完成目标扩增子测序文库构建；

步骤三：对所述扩增子测序文库进行质检，进而对样本的十个靶基因进行高通量测序分析，根据检测结果对样本进行判断。

6.根据权利要求5所述的基于高通量测序的宫颈癌多基因甲基化检测的方法，其特征在于，所述步骤一中转化处理所采用的试剂为亚硫酸盐；所述步骤二中PCR多重扩增反应程序为：99℃2min；25cycles，99℃15sec，60℃4min。