[发明专利]一种经血干细胞膜片的制备方法

说明书

一种经血干细胞膜片的制备方法，包括以下步骤：一、培养基配制备：1.基础培养基；2.添加组分；3.血清；4.胰蛋白酶配制；5.经血保存液的配制。二、经血干细胞膜片制备：1.人经血干细胞原代培养；2.人宫血干细胞传代培养；3.经血干细胞膜片制备；4.经血干细胞膜片内细胞活性鉴定。

技术领域

本发明涉及一种干细胞膜片的制备方法，具体涉及一种经血干细胞膜片的制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

细胞膜片技术是上世纪90年代发展起来的一种组织工程技术，该技术无须支架材料和酶消化，通过刺激细胞外基质分泌，能完整的保留细胞外基质和细胞间连接，形成一种由细胞和细胞外基质组成的致密膜片状组织。细胞膜片厚度与机械强度除了与培养基条件有关，还与细胞类型密切相关，干细胞活性和增殖能力明显增强。经血干细胞是一类具有自我更新、多向分化潜能的间充质干细胞，具有增殖能力强、来源广泛且取材方便无创、培养简单的特点。

子宫内膜严重损伤时内膜功能性修复障碍，代之以结缔组织增生修复，子宫前后壁发生纤维化，瘢痕形成，临床上主要表现为宫腔粘连、闭经及子宫性不孕等，目前尚无有效治疗方法。临床上通用方法是宫腔镜手术机械性分离宫腔粘连，术后放置宫内节育器或防粘连材料(主要是透明质酸、Intercoat gel)等，并于术后给予雌激素促进内膜生长。但对子宫内膜严重损伤，无法解决内膜疤痕问题，不能实现内膜功能性修复，且极易发再次粘连。在专利《胶原支架复合骨髓间充质干细胞制备方法及应用》中使用的是胶原支架复合BMSCs，用于治疗严重子宫内膜损伤。该复合材料利用了外源性胶原，而且骨髓间充质干细胞的获取会对患者造成一定的损伤。

经血干细胞是来源于女性经血中的干细胞，具有活性高、分泌因子能力强等特点。经血干细胞膜片利用自身经血干细胞分泌的细胞外基质，完整的保留细胞外基质和细胞间连接，生物相容性好，而且干细胞活性和增殖能力增强，经血干细胞作为治疗严重子宫内膜损伤的活性成分，具有获取方便的优点，其可以补充局部干细胞数量，并分泌生长因子改善局部微环境及免疫调节等作用。经血干细胞分泌因子能力更强，而且分泌的因子更符合子宫内膜修复的需要。经血干细胞自身分泌的细胞外基质支架具有良好的生物相容性、可降解性及安全性。为经血干细胞提供支持位点，提高局部经血干细胞浓度，延长经血干细胞作用时间。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种经血干细胞膜片的制备方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

一种经血干细胞膜片的制备方法，其特征在于，包括：

一、培养基配制备：

1.基础培养基；

2.添加组分；

3.血清；

4.胰蛋白酶配制；

5.经血保存液的配制；

二、经血干细胞膜片制备：

1.人经血干细胞原代培养；

2.人宫血干细胞传代培养；

3.经血干细胞膜片制备；

4.经血干细胞膜片内细胞活性鉴定。

其中，所述基础培养基，制备基础培养基；

基础培养基：H-DMEM或者DF12；

形式：干粉、液体；

提供状态：无菌；