[发明专利]一种检测试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含LAMP特异性引物对。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述LAMP特异性引物对包括F3，B3，BIP，FIP。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述LAMP特异性引物对中，F3选自SEQID NO:1，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:9，B3选自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:10，BIP选自SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:11，FIP选自SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:12。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述LAMP特异性引物对包括：

BIP-p cagcctcagatctgcgacgcgtcccaagcgcct(SEQ ID NO:1)

FIP-p ccctatgcgatagggcataggacaaccgttag(SEQ ID NO:2)

B3-p ggaactccggaggatatcaac(SEQ ID NO:3)

F3-p tcttttgccggacggagatagt(SEQ ID NO:4)

BIP-c cacggtagcgatgtggtaattcaccttgttag(SEQ ID NO:5)

FIP-c cgaggaaatcttggtaaatggcatcttccagt(SEQ ID NO:6)

B3-c ggagccagatgagccgt(SEQ ID NO:7)

F3-c tcaagccgatccggtgga(SEQ ID NO:8)

BIP-n ccctcggcacgacaatacctagtacctgatatcc(SEQ ID NO:9)

FIP-n tacaaatcacggtagcgatgtggtaattcaccacc(SEQ ID NO:10)

B3-n tcttccttggctccgtatcc(SEQ ID NO:11)

F3-n cgacgcgtcccaagcga(SEQ ID NO:12)。

5.根据权利要求1-4任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括：

步骤一、取待检测番茄品系新鲜果肉20g，加入液氮冻干研磨成粉末，去200mg研磨后的粉末置于1.5mL离心管中，用市售试剂盒提取DNA；

步骤二、所述LAMP特异性引物对包括FIP、BIP、F3和B3，所述LAMP反应体系于25μL体系中进行；反应体系包括KCl 50mmol/L,Tris-HCl(pH8.8)20mmol/L,(NH4)2SO410mmol/L，MgSO48mmol/L,Tween800.1％,F3和B3各0.2μmol/L，FIP和BIP各1.6μmol/L，Betaine0.8mmol/L，Bst DNA聚合酶大片段10U，dNTPs 1.4mmol/L，将上述成分加入扩增管中，65℃恒温水浴60分钟，之后85℃水浴3分钟；

步骤三、向扩增管中加入SYBR Green(1000X)，变绿的的扩增管即为阳性，证明有转基因组织检出。