[发明专利]抗肿瘤活性肽及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗肿瘤活性肽物质及其制备方法和应用，所述抗肿瘤活性肽物质包括氨基酸序列如Seq ID No.1～4所示的活性肽中的一种或几种。所述的抗肿瘤活性肽物质的制备方法，包括以下步骤：1)将豌豆蛋白水溶液热变性处理获得变性豌豆蛋白水溶液；2)酶解所述变性豌豆蛋白水溶液获得豌豆蛋白酶解液；3)超滤分级分离所述获得的豌豆蛋白酶解液，分别收集不同分子量组分；4)将所述收集到的组分中具有抗肿瘤活性的组分经分子筛层析，按峰收集各层析峰组分；5)将所述步骤4)中收集的层析峰组分经RP‑HPLC进一步分离获得抗肿瘤活性肽物质。所述抗肿瘤活性肽能高效抑制癌细胞生长且对正常细胞毒性作用甚微。

技术领域

本发明属于抗肿瘤活性肽技术领域，具体涉及抗肿瘤活性肽物质及其制备方法和应用。

背景技术

在全球范围内，癌症的发病率和死亡率一直居高不下。大多数癌症患者的病情隐匿、潜伏期长、肿瘤生长迅速导致早期诊断困难；并且目前对于癌症的治疗主要是以手术切除为主、辅助化疗、热疗等综合治疗。经治疗后，癌症患者的病情能暂时得到控制，然而手术治疗后肿瘤的耐药、复发和转移等情况经常发生，往往成为患癌人群死亡的主要原因。因此，开发出一种安全无毒的适合癌症病人日常食用及手术等治疗后用于保健的功能性食品或针对于肿瘤病人的高效无毒的临床药物能在一定程度上缓解癌症病情和减轻患者痛苦。

现代营养学研究发现，人体对蛋白质的消化吸收主要是以低肽的形式吸收。据报导，肽的吸收机制优于蛋白质和氨基酸。当前关于肽的活性研究主要集中于其抗氧化、抑菌和降血压等发面。抗肿瘤活性肽作为一种新型的治疗癌症的药物，对肿瘤细胞具有选择性、不易引起耐药性，正越来越受到人们的关注。当前关于抗肿瘤多肽的研究，主要来源是海洋生物类，制备成本高，种类少。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高效、低成本的抗肿瘤活性肽及其制备方法和应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种抗肿瘤活性肽，包括氨基酸序列如Seq ID No.1～4所示的活性肽中的一种或几种，所述抗肿瘤活性肽来源于豌豆蛋白酶解产物。

本发明还提供了所述的抗肿瘤活性肽的制备方法，包括以下步骤：1)将豌豆蛋白水溶液在70℃～90℃热变性处理10min～30min，获得变性豌豆蛋白水溶液；2)酶解所述步骤1)中获得的变性豌豆蛋白水溶液，获得豌豆蛋白酶解液；3)超滤分级分离所述步骤2)获得的豌豆蛋白酶解液，分别收集分子量大于等于60KDa，[6～60)KDa，[1～6)KDa，小于1KDa的组分；4)检测上述收集到的组分的抗肿瘤活性，筛选具有抗肿瘤活性的组分；5)将步骤4)中获得的具有抗肿瘤活性的组分经分子筛层析，按峰收集各层析峰组分；6)检测步骤5)中收集的层析峰组分的抗肿瘤活性，筛选抗肿瘤活性最强的组分经反相高效液相RP-HPLC分离，收集所有出峰产物获得抗肿瘤活性肽。

优选的，步骤1)中所述豌豆蛋白水溶液的质量浓度为2～8％。

优选的，步骤2)中所述酶解使用的酶为碱性蛋白酶。

优选的，所述碱性蛋白酶相对于变性豌豆蛋白的用量为14000～18000U/g。

优选的，步骤2)中所述酶解的温度为45℃-60℃。

优选的，步骤2)中所述酶解的时间为4～6h。

本发明还提供了所述的抗肿瘤活性肽在制备抗肿瘤药物或抗肿瘤功能性食品中的应用。

优选的，所述肿瘤包括肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、食道癌、结肠癌或宫颈癌。