[发明专利]一种尿苷二磷酸的制备方法

说明书

本发明提供了一种尿苷二磷酸的制备方法，其包括如下步骤：将尿苷、磷酸二氢钠、葡萄糖、硫酸镁与啤酒酵母混合发酵，发酵终止后得尿苷二磷酸发酵液；然后将所述的尿苷二磷酸发酵液进行冰块降温预处理，并通过分离提纯；再将纯化后的尿苷二磷酸进行醇沉结晶，最后进行干燥、粉碎处理。本方法获得的尿苷二磷酸产品的紫外纯度在80％以上，含水量在8％以下，质量得率在60％以上，相对于核苷酸发酵来说，本方法生产UDP的发酵时间缩短为1/2～2/3；预处理时间缩短为2/5；分离纯化的时间缩短为3/5。

技术领域

本发明涉及一种尿苷二磷酸的制备方法，具体地说，是以尿苷为原料，通过发酵和醇沉结晶两步法生产尿苷二磷酸的方法。

背景技术

上世纪六、七十年代，我国开始以核苷一磷酸为原料，利用酵母发酵生产核苷三磷酸(NTP)，主要生产腺苷三磷酸(ATP)和胞苷三磷酸(CTP)。利用酵母发酵生产ATP的研究较多，在七、八十年代已有较稳定的发酵生产工艺，并能进行小规模的生产。但这种发酵生产ATP、CTP等的工艺过程还存在很多的弊端，比如工艺复杂、操作繁琐、生产成本高，而且不适合大规模生产。主要原因如下：

1、发酵底物浓度低,一般低于2％或20mg/ml，所得产物量不高，因而导致发酵设备利用率低，劳动生产率低，使生产成本增加。

2、发酵液预处理工艺不合理，使用离心分离和酒精沉淀再回溶的法，能耗大，时间长，回收率低。

3、分离纯化工艺不合理，分离纯化中采用的方法和使用的设备已落后，使周期长，回收率低，产品质量低，成本增加。

尿苷二磷酸(UDP)是合成阿普林津(Ampligen)的原料之一。阿普林津是一种错配双链RNA药物(Polyl:C12U)，具有抗病毒和免疫调节的双重作用，高效低毒。目前，在国外该药正在进行一些疾病的临床实验，包括慢性疲劳综合症、艾滋病、乙肝等。

对于尿苷二磷酸(UDP)和尿苷三磷酸(UTP)的制备方法很少有人进行深入的研究，只是其衍生物，尤其是UDP糖类由于药用广泛而引起国内外的重视。比如，专利文献98801453.X公开了一种尿苷二磷酸N乙耽葡糖胶的制备方法，该方法使用微生物菌体，由尿苷酸(UMP)和N乙耽葡糖胶制备尿苷二磷酸N乙耽葡糖胶(UDPAG)，并使N乙耽葡糖胶激酶共存。但到目前为止，国内仍没有高效率、低成本、操作简便的UTP和UDP生产工艺。

发明内容

本发明的目的是提供一种尿苷二磷酸(UDP)的制备方法，该方法生产周期短，产品得率高、成本低、操作简便。

本发明所述尿苷二磷酸(UDP)的制备方法，包括如下步骤：

1)将尿苷、磷酸二氢钠与啤酒酵母混合发酵，发酵终止后得尿苷二磷酸发酵液；

2)将所述的尿苷二磷酸发酵液进行冰块降温预处理，并通过微滤装置分离出澄清的微滤液；

3)将所述的微滤液进行分离纯化，采用不同浓度NaCl溶液进行淋洗、洗脱；

4)将所述洗脱后的收集液进行纳滤除盐；

5)将所述纳滤后的收集液用强碱型阴离子交换柱树脂进行脱色；

6)将脱色后的尿苷二磷酸进行醇沉结晶、干燥。

其中，尿苷作为底物，以选用高纯度的为佳，如液相纯度在98％以上。

本发明所用的啤酒酵母(Saccaromycescerevisiae)可采用新鲜啤酒酵母，也可采用啤酒生产过程中淘汰的啤酒酵母，从经济角度考虑，采用啤酒生产中淘汰的但仍具有较高酶活性的酵母，该酵母细胞存活率在85％以上即可。其经过离心或压榨后成干酵母，酵母的含量(重量百分比)在20～25％。