[发明专利]原位杂交检测环状RNAcircRNF13的试剂在制备舌鳞癌患者预后制剂上的应用

说明书

本发明公开了原位杂交检测环状RNA circRNF13的试剂在制备舌鳞癌患者预后制剂上的应用。对88例舌鳞癌患者进行了电话随访，详细询问了他们的首发时间、治疗情况、有无复发、有无再患其他疾病、复发及死亡时间等，并登记了生存时间和状态，并对舌鳞癌组织中circRNF13的表达与病人的生存时间和状态进行的生存分析，发现舌鳞癌组织中不表达circRNF13的患者平均生存时间明显短于circRNF13表达较高的患者。说明circRNF13是一个与舌鳞癌预后相关的分子标记，该circRNA表达低或不表达，病人预后差。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及原位杂交检测环状RNA circRNF13的试剂在制备舌鳞癌患者预后制剂上的应用。

背景技术

人类基因组计划及其后续的DNA元件百科全书计划(The Encyclopedia of DNAElements Project,ENCODE)研究成果表明，蛋白编码基因序列仅占人类基因组序列的1-3％，而人类基因组中绝大部分可转录的序列为非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。非编码RNA尽管不编码蛋白质，但由于广泛参与了细胞内基因表达调控，在生物医学研究领域一直备受关注。研究得较多的是线性的ncRNA分子，从RNA序列长短可分为微小RNA(microRNA,miRNA,19-23nt)和长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs,>200nt)，它们在包括恶性肿瘤在内的多种人类常见疾病的发生发展中发挥着重要的功能。最近，一类全新的ncRNA分子，环状RNA(circular RNA,circRNA)由于其独特的构型和被日益发现的重要生物学功能，已经成为生物医学领域新的前沿和热点。

circRNA曾一度被当做基因转录后加工过程中的错误产物。和mRNA及lncRNA等线性RNA的加工过程很相似，circRNA的形成也是由剪接复合体对RNA前体进行剪接加工时生成的，只不过在这一过程中，侧翼的成环序列首先结合成环，随后剪接复合体进行剪接，最终将侧翼序列切除形成circRNA。近年来随着测序技术尤其是RNA-seq等新一代测序技术的发展，越来越多的circRNA被人们发现，并已经通过研究揭示了部分circRNA在众多的生命活动中都发挥着重要的作用。此外由于其独特的结构导致circRNA对核酸酶不敏感，在肿瘤标志物的开发应用方面circRNA也具有明显优势，因此极有可能作为一种重要的分子标志物和新兴的药物开发的靶点。但由于本领域刚刚兴起，大部分circRNA尚未被发现或者尚无研究。

舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是发病率最高的口腔恶性肿瘤，舌鳞癌多数为鳞癌，多发生于舌缘，其次为舌尖、舌背及舌根等处，常为溃疡型或浸润型。一般恶性程度较高，生长快，浸润性较强，常波及舌肌，致使舌运动受限，使说话、进食及吞咽均发生困难。手术治疗辅以顺铂类药物为主的化疗是舌鳞癌临床上主要的治疗方案。然而，在临床中发现舌鳞癌患者的治疗效果往往不理想，5年生存率仅为55-65％，究其原因主要在于手术残留的癌细胞(比如已经侵袭转移到了血管或淋巴管中的循环肿瘤细胞)普遍存在的耐药，导致肿瘤的复发和转移，引起治疗失败。因此，找出舌鳞癌细胞对化疗药物的抵抗机制，筛选新的药物作用靶点，最终提高患者生存率和生存质量，是值得临床科研工作者们研究的重要课题。

为了研究circRNA在舌鳞癌细胞对顺铂类药物耐药中的作用和机制，我们使用Agilent公司的circRNA基因芯片Arraystar Human Circular RNA Microarray V2.0对两对顺铂处理前后的舌鳞癌细胞株(Tca8113和Cal27)中circRNAs的表达情况进行了分析。我们发现circRNF13的表达变化最为显著，提示circRNF13可能和舌鳞癌的顺铂耐药相关，而到目前为止，circRNF13的生物学功能和作用机制未见任何报道。