[发明专利]一种蛋白结合型纳米硒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种蛋白结合型纳米单质硒的制备方法，其特征在于：该制备方法是将含二硫键的蛋白或多肽在二硫键还原剂的还原作用下将其内部空间结构打开后，然后与硒化合物进行混合，再透析分离，获得蛋白结合型纳米单质硒；具体按照以下步骤：

A、将含二硫键的蛋白或多肽的溶液，与二硫键还原剂溶液混合，进行反应10-300min，得到空间结构展开的蛋白均质溶液；

B、向步骤A得到的蛋白均质溶液中加入硒化合物的溶液，充分搅拌0.1～24h，得到蛋白结合型纳米单质硒的粗溶液；

C、将步骤B得到的粗溶液进行透析，得到蛋白结合型纳米单质硒纳米制剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述二硫键还原剂为二硫苏糖醇、β-巯基乙醇、三(2-羧乙基)膦、半胱氨酸或谷胱甘肽；

所述含二硫键的蛋白或多肽为人血清白蛋白、重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白、驴血清白蛋白、转铁蛋白中的一种以上；

所述硒化合物为二氧化硒、亚硒酸盐或硒酸盐。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤A所述含二硫键的蛋白或多肽的溶液浓度为0.01～200mg/mL；所述二硫键还原剂溶液是指二硫键还原剂的磷酸盐缓冲液，pH值为5.0-9.0，其浓度为0.01～60mM；所述反应的温度为10-60℃；所述空间结构展开的蛋白均质溶液中蛋白的终浓度为0.01～100mg/mL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤B所述硒化合物的溶液的浓度为0.01～30mM；所述向步骤A得到的蛋白均质溶液中加入硒化合物的溶液，获得蛋白溶液中蛋白的终浓度为0.01～100mg/mL；所述充分搅拌是在0-40℃下搅拌。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤C所述透析是将粗溶液放入透析袋，并于0-20℃低温PBS溶液中透析除去多余的二硫键还原剂和硒化合物及其副产物；透析分子截留不低于1000。

6.一种由权利要求1-5任一项所述的制备方法制备得到的蛋白结合型纳米单质硒，其特征在于：所述蛋白结合型纳米单质硒中的硒与白蛋白的摩尔分子比为(1～30)：1，粒径分布范围为10～200nm；所述蛋白结合型纳米单质硒在0～10℃下的水溶液中以均一分散形式保存长达12个月，在10～40℃下的水溶液中以均一分散形式保存长达4个月；所述蛋白结合型纳米单质硒在pH值1-3的胃蛋白酶溶液、pH值6.8的肠胰酶溶液，或替代血浆中以均一形式稳定存在。

7.根据权利要求6所述的蛋白结合型纳米单质硒在制备缺硒或硒功能治疗药物中的应用。