[发明专利]一种水稻转运蛋白基因的启动子及其应用

权利要求书

1.一种水稻转运蛋白基因的启动子，其特征在于所述启动子的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

（1）如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

（2）在严格条件下能够与（1）中所述序列的DNA杂交的DNA序列；

（3）与（1）或（2）所述序列有至少80%序列相似性，且具有相同功能的DNA序列；

（4）与（1）-（3）之任一所述序列互补的DNA序列；

（5）编码的氨基酸序列与（1）-（4）之任一所述序列编码的氨基酸序列相同的DNA序列；

（6）与（1）-（5）之任一所述序列进行一个或多个碱基的取代、缺失和/或添加且具有相同功能的DNA序列。

2. 根据权利要求1所述的一种水稻转运蛋白基因的启动子，其特征在于所述启动子区域包含关键元件，所述关键元件的顺式调控元件信息如表中TABLE ID NO ：2 所示。

3.根据权利要求1所述的一种水稻转运蛋白基因的启动子，其特征在于所述启动子与逆境胁迫有关，受逆境胁迫诱导，可提高植物抗逆性。

4.权利要求1所述的启动子在植物基因功能研究或遗传育种中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述植物为单子叶禾本科植物。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的单子叶禾本科植物为玉米、小麦或水稻。

7.根据权利要求1所述的一种水稻转运蛋白基因的启动子，其特征在于所述启动子的获得方法步骤如下：

（1）采用稻瘟病菌株对三叶一心期的抗病品种粳稻云引和感病品种丽江新团黑谷进行喷雾接菌，在接种后0h, 12h, 24h, 36h, 48h, 72h和96h 7个时间点收获云引叶片，用于提取RNA，进行基因芯片杂交；

（2）将基因芯片的原始数据标准化后，对芯片结果作初步分析，初步筛选显著差异表达基因，构建云引受稻瘟病菌诱导后的基因表达谱，然后对基因表达谱进行系统的生物信息学分析，通过SOM聚类，进一步筛选差异表达基因，进行聚类分析，构建基因随时间变化趋势聚类图；

（3）通过GO的富集分析，找出在GO分类中最显著的类别，构建出GO和基因的调控网络图谱：通过Pathway的富集分析，最显著富集的Pathway为Carbon fixation和Glycolysis/Gluconeogenesis,构建出Pathway和基因的调控网络图谱，通过GO和Pathway富集分析，发现AK073902基因是在两个富集中均为显著差异的基因之一；

（4）根据AK073902参考基因启动子序列设计引物，并以云引DNA为模板，扩增克隆获得相应的DNA序列，其中，扩增按以下程序进行扩增：95℃预变性3min，95℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸120s，变性-复性-延伸共30个循环，72℃ 总延伸5min，引物序列如下：

MATE3-PF:5’-TCTTGTGATGCTGTGAGAGTGGTGATTATG-3’，

MATE3-PR:5’- GAGACCAAATCACGCAGGCAACAAATA -3’；

（5）通过上述步骤（4）操作，获得OsMATE3基因启动子PCR 扩增产物并送生物技术公司测序，测序结果采用NCBI、BLAST及DNAMAN等软件进行比较分析，对云引中AK073902与Nipponbare序列进行比较，最终获得OsMATE3基因启动子。