[发明专利]一种依托致敏血小板构建的治疗免疫性血小板减少症的载药体系的新方法

说明书

本发明公开了一种依托致敏血小板构建的治疗免疫性血小板减少症的载药体系的新方法。首先将全血抗凝、离心制得富血小板血浆，再通过深度离心洗涤获得洗涤血小板，将洗涤血小板与CD41单抗震荡反应，经离心获得修饰了CD41单抗的靶向巨噬细胞的致敏血小板。接着将上述致敏血小板与免疫抑制剂或化学修饰的细胞毒药物混合孵育，经离心、纯化，最终得到携载抗免疫性血小板减少症药物的致敏血小板载药体系。该载药体系具有来源丰富、载药率高、生物相容性好、靶向性强、循环时间长等优势，可使药物精准靶向巨噬细胞，增加药物在巨噬细胞内的浓度，从而增加药物的疗效，同时有效地减轻对正常组织的毒副作用。

技术领域

本发明涉及一种载药体系，具体涉及一种依托致敏血小板构建的治疗免疫性血小板减少症的载药体系的新方法。

背景技术

免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia，ITP)是一种获得性的自身免疫病，育龄期妇女多见，年发病率约为12/10万人。近年来发病率呈逐年上升，其中难治性ITP约占1/10。多项研究表明，ITP是由于病毒感染或不明原因的血小板结构变化产生自身抗血小板抗体，被抗体致敏的血小板在肝、脾的巨噬细胞内被破坏从而导致外周血小板减少。参与血小板破坏的单核巨噬细胞主要通过三方面发生作用：(1)内吞致敏血小板，并激活补体系统，导致血小板的持续破坏；(2)作为体内最重要的抗原呈递细胞(APC)，呈递多种抗原给CD4+Th，导致该自身反应性T细胞凋亡受抑，刺激B淋巴细胞增殖，不断产生自身抗血小板抗体，形成致敏血小板；(3)刺激B淋巴细胞产生抗体，抗体作用于骨髓内巨核细胞导致其形态受损，从而抑制血小板生成。因此，血小板破坏的主要参与细胞—巨噬细胞是ITP治疗的关键靶细胞。

治疗ITP主要立足于抑制血小板自身抗体的产生和减少血小板的破坏。糖皮质激素是治疗ITP的首选药物，尽管70％～80％的患者达到初始缓解，但长期缓解率不到30％。丙种球蛋白、促血小板生成素等药物均疗效短暂且价格昂贵。并且，ITP患者因相关治疗带来的风险甚至大于疾病本身的风险。因此如何在尽量减低治疗毒性的前提下有效治疗ITP成为目前治疗研究的热点。

我们设想如能将免疫抑制剂装载于已致敏的血小板中，利用患者体内的巨噬细胞能主动识别致敏血小板并将其吞噬破坏，将药物精准的运载到巨噬细胞内，从而抑制其功能，达到治疗ITP的目的。同时药物基本都在巨噬细胞内释放，可能最大程度上避免其对其他组织细胞的毒副作用。如能成功，将实现对ITP患者体内破坏血小板的巨噬细胞的精确靶向治疗，这将是ITP治疗的崭新途径。

血小板具有良好的生物利用度、安全性、及较长的血循环时间，并且有较高的载药量。因此，血小板可以成为ITP患者药物靶向治疗的良好载体，以巨噬细胞表面的Fc受体为靶点，靶向载药运输到参与血小板破坏的巨噬细胞。

致敏血小板包载药物作为主动靶向载药体系研究成果既达到了抑制血小板自身抗体的产生和减少血小板的破坏的治疗目的，又有望避免细胞毒药物及脾切除手术的相关副作用，将为治疗ITP药物的体内有效传递建立一种通用的靶向载体平台，具有重要的学术意义和应用价值，为临床ITP的长期维持治疗提供有力的手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种依托致敏血小板构建的治疗免疫性血小板减少症的载药体系的新方法，制成携载抗免疫性血小板减少症药物的致敏血小板靶向巨噬细胞的载药体系，具有生物相容性好、载药率高、主动靶向性强，从而增加药物的疗效，减少药物毒副作用等优点。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：

一种依托致敏血小板构建的治疗免疫性血小板减少症的载药体系的新方法，包括以下步骤：

(1)环境温度为20±5℃，在全血中加入重量百分含量为2-4％柠檬酸钠溶液，离心后得到富血小板血浆；

(2)将步骤(1)得到的血小板丰富血浆再深度离心，并用PBS缓冲液洗涤至不再含有血浆及其他血液成分，得到洗涤血小板；