[发明专利]体液的细胞分析

说明书

本文提供在血液学分析器上进行细胞分析的方法。在各种方面，所述方法提供红细胞(RBC)与白细胞(WBC)之间的分离和/或区分，其利用荧光染料来选择性染色WBC以使得其发出更强的荧光信号。所述方法提供对于WBC和RBC的最佳检测极限，从而允许分析具有稀少细胞浓度的样品。可使用仅仅一种试剂来制备用于体液分析的单一稀释液，从而简化所述体液分析。使用本公开的多个方面中描述的无溶胞方法来实现对于WBC的最小破坏。

(本申请是申请日为2012年12月19日、申请号为201280064502.X(国际申请号为PCT/US2012/070696)的发明申请的分案申请。)

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年12月27日提交的美国临时专利申请序号61/580,623的优先权权益；所述美国临时专利申请的整个公开内容以引用的方式整体并入本文。

背景技术

各种方法用于细胞分析，包括经由光或荧光显微术的目测和/或自动检验。通常实施这些类型的细胞检查和分析以便获得关于样品中的细胞谱系、成熟阶段和细胞计数的信息。

流式细胞术是在非均质样品中的不同细胞类型之间进行识别和区分的方法。在流式细胞仪中，细胞一次一个或几乎一次一个穿过感测区域，其中每个细胞被能量源照射。典型地，单一波长光源(例如，激光器等)用作能量源并且各种传感器中的一个或多个基于细胞与施加能量的相互作用来记录数据。流式细胞术普遍地用于血液学并且已经尤其成功地诊断血液癌症。除了流式细胞术以外，其它分析方法用于血液学中并且表征细胞群体。

血液样品倾向于具有高浓度的细胞。不论通过流式细胞术或其它技术，具有显著较低浓度细胞的样品的分析较困难并且因此不太常见。另外，被设计成测量全血样品的传统血液学分析器倾向于具有对于低端细胞浓度的有限检测灵敏度。在一些情况下，样品的手动检查是细胞分析的唯一可用方法。在医学、微生物学和其它领域需要分析具有低细胞计数的样品的改进方法。

发明内容

在一方面，本公开提供分析含有细胞的体液的方法，所述方法包括：用荧光染料将体液染色，其中荧光染料渗透细胞膜并且结合至核酸以在细胞内形成染料复合物；用来自能量源的能量照射染色体液；并且测量染色体液中的由染料复合物发出的荧光信号。

在一些这类方面，体液包含少于约20个细胞/微升。

在一些这类方面，体液包含超过约20个细胞/微升。

在一些这类方面，核酸选自DNA和RNA。

在一些这类方面，能量源提供具有可见光谱中的波长的单色光，并且其中单色光的波长和荧光信号的波长是不同的。

在一些这类方面，与染料复合物相比，未结合荧光染料在用来自能量源的能量照射时发出较少荧光。

在一些这类方面，在未结合至核酸时，未结合荧光染料在用来自能量源的能量照射时不发荧光，以使得没有染料复合物的细胞不发出荧光信号。

在一些这类方面，所述方法包括基于存在或不存在荧光染料来区分具有细胞核的细胞与没有细胞核的细胞。

在一些这类方面，测量涉及点计(enumerating，计算、计数)和区分RBC和WBC。

在一些这类方面，所述方法在测量之前不涉及使RBC溶解(lysing)。

在一些这类方面，体液包含完整WBC和RBC。

在一些这类方面，测量使用自动血液分析器、流式细胞仪或体液样品的其它诊断分析器来执行。

在一些这类方面，测量包括使体液流经血细胞计数器中的流槽(flow cell，流动室)。

在一些这类方面，荧光染料提供在进一步包括水的组合物中。