[发明专利]一种针对尿液样本的蛋白质组学质谱检测方法

权利要求书

1.一种针对尿液样本的蛋白质组学质谱检测方法，其特征在于，所述方法利用可变窗口的数据非依赖性质谱采集方法，其每个循环扫描模式包含一个一级全扫描和30个可变窗口的数据非依赖性二级扫描，所述30个可变窗口如下：m/z 349-374，m/z 374-393，m/z393-408，m/z 408-420，m/z 420-432，m/z 432-442，m/z 442-454，m/z 454-465，m/z 465-477，m/z 477-488，m/z 488-499，m/z 499-509，m/z 509-521，m/z 521-532，m/z 532-545，m/z 545-558，m/z 558-571，m/z 571-589，m/z 589-604，m/z 604-620，m/z 620-638，m/z638-659，m/z 659-679，m/z 679-701，m/z 701-730，m/z 730-768，m/z 768-810，m/z 810-857，m/z 857-947，m/z 947-1489。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一级全扫描的扫描范围为m/z 350-1400；

优选地，所述方法采用的检测系统为：纳流液相色谱-四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱系统。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述纳流液相色谱的色谱柱为自制纳流C18色谱柱；上样量为1-5μL；流速为200-300nL/min。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述纳流液相色谱以0.1％的甲酸水溶液为A流动相，以0.1％甲酸-乙腈溶液为B流动相。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述纳流液相色谱的分析梯度为：0-2min，3％-7％B流动相；2-52min，7％-22％B流动相；52-62min，22％-35％B流动相；62-64min，35％-90％B流动相；64-80min，90％B流动相。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述高分辨质谱系统选择的离子源为纳喷雾离子源，正离子模式；喷雾电压为1.8-2.2KV；离子传输管温度为280-350℃。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述可变窗口的数据非依赖性质谱采集方法中质谱条件：一级全扫描，扫描范围：m/z 350-1400；一级检测：轨道阱质量分析器，分辨率60K，选择模式：四级杆；隔离窗口：30个可变窗口的数据非依赖性二级扫描；碎裂模式：高能碰撞解离，碎裂能量为30％；二级检测：轨道阱质量分析器，分辨率30K；二级扫描范围：m/z200-2000；最大离子注入时间：55ms。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中还包括尿液样本特异性谱图库构建，所述谱图库涵盖一级母离子和二级碎片信息。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述尿液样本特异性谱图库构建的方法为：取10例疾病组的尿液样本进行等量混合，制成疾病组混合尿液样本；取10例健康组的尿液样本进行等量混合，制成健康组混合样本，将两个混合样本分别进行碱性条件下的反相预分级，分级成5个馏分，每个馏分分别采用数据依赖型质谱方法进行采集，同时未分级的混合样品也采用数据依赖型质谱方法进行4次重复采集；将采集得到的总共18个质谱数据搜库后用于构建谱图库。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述针对尿液样本的蛋白质组学质谱检测方法具体为：

(1)可变窗口的数据非依赖性质谱采集：

检测系统：纳流液相色谱-四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱系统；

色谱条件：色谱柱为自制纳流C18色谱柱；上样量为1-5μL；流速为200-300nL/min；以含0.1％甲酸的水溶液为A流动相，以含0.1％甲酸的乙腈溶液为B流动相，分析梯度为：0-2min，3％-7％B流动相；2-52min，7％-22％B流动相；52-62min，22％-35％B流动相；62-64min，35％-90％B流动相；64-80min，90％B流动相；

质谱方条件：离子源为纳喷雾离子源，正离子模式；喷雾电压为1.8-2.2KV；离子传输管温度为280-350℃；

非依赖性质谱采集：

循环模式：一个一级全扫描+30个可变窗口的数据非依赖性二级扫描；

一级扫描模式：全扫描；一级扫描范围：m/z 350-1400；一级检测：轨道阱质量分析器，分辨率60K；选择模式：四级杆；30个可变窗口：m/z 349-374，m/z 374-393，m/z 393-408，m/z408-420，m/z 420-432，m/z 432-442，m/z 442-454，m/z 454-465，m/z 465-477，m/z 477-488，m/z 488-499，m/z 499-509，m/z 509-521，m/z 521-532，m/z 532-545，m/z 545-558，m/z 558-571，m/z 571-589，m/z 589-604，m/z 604-620，m/z 620-638，m/z 638-659，m/z659-679，m/z 679-701，m/z 701-730，m/z 730-768，m/z 768-810，m/z 810-857，m/z 857-947，m/z 947-1489；碎裂模式：高能碰撞解离，碎裂能量为30％；二级检测：轨道阱质量分析器，分辨率30K；二级扫描范围：m/z 200-2000；最大离子注入时间：55ms；

(2)尿液样本特异性谱图库构建

取10例疾病组的尿液样本进行等量混合，制成疾病组混合尿液样本；取10例健康组的尿液样本进行等量混合，制成健康组混合样本，将两个混合样本分别进行碱性条件下的反相预分级，分级成5个馏分，每个馏分分别采用数据依赖型质谱方法进行采集，同时未分级的混合样品也采用数据依赖型质谱方法进行4次重复采集；将采集得到的总共18个质谱数据搜库后用于构建谱图库，所述谱图库涵盖一级母离子和二级碎片信息；

(3)将构建的谱图库用于数据非依赖性质谱数据的谱图提取，以实现定性和定量分析。