[发明专利]一种快速检测甲、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种直接快速检测样本中的甲、乙型流感病毒的核酸检测试剂盒，该试剂盒由下列成分组成：裂解液和磁珠悬浮液，其中，裂解液由下列成分组成：1M NaCl、0.01%Triton-X和0.001M KCl，磁珠悬浮液包括羟基修饰的磁珠，多分散系数＜0.2;磁珠为直径小于或等于500nM，其中，磁珠的含量为10mg/mL；其中，试剂盒还包括如SEQ.1.1-1.3; SEQ.2.1-2.3和SEQ.3.1-3.3所示的引物序列和探针序列。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，当裂解液和磁珠溶液混合后，两者的体积比为200:1。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，该试剂还包括一种混合物，该混合物为溶液混合物，该混合物中包括裂解成分和磁珠，其中裂解成分由下列成分组成：1M NaCl、0.01%Triton-X和0.001M KCl，磁珠为0.005微升的10mg/mL的羟基磁珠。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，该试剂盒还包括PCR反应扩增的所必须的成分，所述的扩增试剂包括1～10mmol/L的Mg2+，10～50mmol/L的Tris–HCl缓冲液；浓度25mmol/L的K离子，50-1000umol/L的DNTP，100μg/ml的酶稳定性试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中该试剂盒还包括：Taq酶，RNA反转录酶，阴性对照、阳性对照，内控IC，说明书和盒体组成。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，采用该试剂盒检测的样本为拭子样本，其中拭子样本溶于1-5mL生理盐水中。

7.一种不以疾病诊断为目的的检测样本甲、乙型流感病毒的方法，该方法包括：提供如权利要求1-6之一所述的试剂盒，核酸样本的提取和扩增，其中，所述的核酸提取的方法如下：

（1）、让样本，内控与磁珠裂解液在PCR管中接触，其中磁珠裂解液与样本与内控的体积比为80:20:1，其中，所述样本为20微升咽拭子样本； （2）、对步骤（1）的PCR管加热60-100℃，5min后室温放置10min；

（3）、去除PCR管中的液体，仅仅保留磁珠，同时不对磁珠做任何后续的处理；

（4）、向PCR管中添加核酸必要的试剂，这样的试剂包括扩增试剂和RNA反转录酶，所述的扩增试剂包括如SEQ.1.1-1.3; SEQ.2.1-2.3和SEQ.3.1-3.3所示的引物序列和探针序列以及Taq酶；

（5）、进行PCR至少一个循环的扩增。

8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述的咽拭子样本是溶解在生理盐水中的样本。

9.根据权利要求7所述的方法,其中,让磁珠和扩增试剂和RNA反转录酶同时接触；或者，先让步骤（3）中的磁珠与RNA反转录酶接触，然后让磁珠和RNA反转录酶分离，让被分离的磁珠和扩增试剂接触。