[发明专利]一种大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存方法在审
| 申请号： | 201810173125.2 | 申请日： | 2018-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN108244099A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 邹琰;宋爱环;胡发文;王英俊;刘童;吴莹莹;刘洪军;郭文 | 申请（专利权）人： | 山东省海洋生物研究院 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266104 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大泷六线鱼 超低温冷冻保存 抗冻液 精子 遗传多样性保护 海洋生物技术 降温处理 人工繁育 种质保存 重要意义 抗冻剂 体积比 稀释液 分装 精液 液氮 保存 养殖 | ||
1.一种大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：
将大泷六线鱼的精液与抗冻液按体积比1∶10的比例混合，混合后经过两步降温处理，最终投入到液氮(-196℃)，分装保存；抗冻液由稀释液、抗冻剂两部分组成，其中稀释液为NaCl 8g/L，KCl 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，NaHCO30.35g/L溶液；抗冻剂为15％(抗冻剂的终浓度；V/V)EG(乙二醇)。
2.按权利要求1所述的大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：所述抗冻液是将抗冻保护剂与稀释液混合，制成比例为15％EG(V/V)的混合液，并置于4℃冰箱备用。
3.按权利要求1所述的大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：选用1.8ml的冻存管，每管加入100μL鲜活精液，再加入1000μL的抗冻液(混合比1∶10)，随后放入4℃冰箱预冷，使抗冻保护剂充分渗入细胞中。
4.按权利要求1所述的大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存的方法，其特征在于：将分装后的精液先置液氮罐口下(-4～-10℃)预冷约15～20min，然后迅速降至液氮面上1-2cm处(-160～-180℃)15-20min，再投入液氮中保存，保存至激活。
5.按权利要求1所述的大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：将分装保存于液氮中的大泷六线鱼冻精进行解冻，具体方法为：解冻时将器皿提至液氮罐口下平衡5min，然后迅速将冻存管拿出，35℃恒温水浴约1min，轻轻摇动使其受温均匀，待只剩一点冰屑时取出。
6.按权利要求1所述的大泷六线鱼精子高效超低温冷冻保存方法，其特征在于：吸取精液，在添加有100μL10％(v/v)胎牛血清(BSA)的过滤海水中激活，镜检其活力，然后用计算机辅助精子分析(CASA)系统计算精子运动率等指标。
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