[发明专利]一种降解霉菌毒素标准品的体外评估方法

说明书

本发明创造涉及一种降解霉菌毒素标准品的体外评估方法，所述准确称取0.05g霉菌毒素生物降解剂于50mlLB液体培养基中（添加量为1‰），于恒温培养箱中37℃、200r培养48h；其中LB培养基组分：胰蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母浸粉5g，用蒸馏水定容到1000mL，调节pH=7.4，16层纱布，8层牛皮纸封口后，于121℃，高压灭菌20min；培养结束后，取10ml培养液于50ml离心管中作为处理组，另取10mlLB液体培养基于50ml离心管中，分别加入适量霉菌毒素标准液（可根据体系所需霉菌毒素浓度调整标准品的添加比例），于恒温培养箱中37℃、200r培养2h；本发明使用霉菌毒素标品做降解率检测，可以排除其他因素的干扰，准确度高、可行性强。

技术领域

本发明属于降解霉菌毒素技术领域，具体涉及一种降解霉菌毒素标准品的体外评估方法。

背景技术

霉菌毒素对农作物的污染给食品工业、饲料工业和畜牧业生产带来了一系列不容忽视的问题。据估计，全世界每年约有25.0％的农作物受到霉菌毒素污染，平均有2.0％的粮食由于霉变而不能食用，这是一笔极大的浪费，至于因霉变而对人畜引起的健康等危害，更是难以统计。因此，为了解决霉菌毒素污染问题，出现了多种多样的脱霉剂产品，传统的物理和化学去毒方法效果不稳定、营养成分损失大、影响饲料适口性，且难以规模化生产等缺点而不能被广泛应用到实际生产中，大部分吸附剂只对黄曲霉毒素有吸附效果，对其他霉菌毒素吸附能力差；吸附维生素、微量元素等；降低饲料营养价值；吸附剂效果不稳定，而生物降解方法具有解毒效率高、特异性强、不破坏饲料营养价值、对环境没有污染等优点备受关注。

霉菌毒素生物降解是指微生物、植物及其代谢产生的酶与毒素作用，使其分子结构中毒性基团被破坏而生成无毒降解产物的过程。动物采食了含有霉菌毒素的饲料之后，在胃和肠道内各种酶及微生物的作用下，饲料被消化吸收，同时霉菌毒素也被进一步解离出来，饲养中添加的霉菌毒素生物降解剂在肠道内适宜的温度和ph条件下可以更好的降解霉菌毒素。目前市场上有多种多样的脱霉剂，但吸附剂类脱霉剂吸附效果不稳定，且容易出现解吸附现象，因此，没有一套系统的评估方法，而生物降解剂需要在适宜微生物生产的条件下才会发挥更好的解毒作用，由于体外与体内环境不同，目前还没有完整的评估霉菌毒素生物降解剂的方法。因此，在体外模拟动物肠道内环境，进行霉菌毒素生物降解剂效果的评估，会使结果更加准确、可靠，且更有利于霉菌毒素生物降解技术的推广及应用。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，而提供一种降解霉菌毒素标准品的体外评估方法。

本发明的目的是这样实现的：一种降解霉菌毒素标准品的体外评估方法，所述准确称取0.05g霉菌毒素生物降解剂于50mlLB液体培养基中（添加量为1‰），于恒温培养箱中37℃、200r培养48h；其中LB培养基组分：胰蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母浸粉5g，用蒸馏水定容到1000mL，调节pH=7 .4，16层纱布，8层牛皮纸封口后，于121℃，高压灭菌20min；培养结束后，取10ml培养液于50ml离心管中作为处理组，另取10mlLB液体培养基于50ml离心管中，分别加入适量霉菌毒素标准液（可根据体系所需霉菌毒素浓度调整标准品的添加比例），于恒温培养箱中37℃、200r培养2h。

分别取步骤2中培养结束后的培养液1ml于10ml离心管中，各加入4ml提取液（黄曲霉毒素B1的提取液为甲醇，玉米赤霉烯酮的提取液为乙腈，呕吐毒素提取液为水），离心、过膜，用高相液相色谱检检测各体系霉菌毒素含量，并计算降解率，

霉菌毒素降解率=

其中C0为对照组培养结束后反应体系中霉菌毒素浓度（ng/mL）

其中C1为处理组组培养结束后反应体系中霉菌毒素浓度（ng/mL）。