[发明专利]一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸及其检测方法

权利要求书

1.一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸，包括底板(7)，其特征在于：所述的底板(7)从左至右依次并排粘贴有样品垫(1)、标记垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)。

2.根据权利要求1所述的一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸，其特征在于：所述的样品垫(1)为玻璃纤维膜；所述的标记垫(2)的表面涂覆有胶体金标记的鼠抗DMO单克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜(3)包括包被有鼠抗DMO单克隆抗体的检测区和包被有抗鼠IgG二抗的控制区。

3.根据权利要求1或2所述的一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸，其特征在于：所述的胶体金标记的鼠抗DMO单克隆抗体的涂覆量为5ng-50ng，所述的硝酸纤维素膜上鼠抗DMO单克隆抗体的量为0.4μg-1.2μg。

4.根据权利要求3所述一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸，其特征在于：其中的鼠抗DMO单克隆抗体通过用DMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠，选择状态良好的、对HAT敏感的SP2/0细胞株与免疫鼠脾细胞进行融合，有限稀释法克隆3次至阳性率达到100％，细胞建株，扩大培养，获得杂交瘤细胞株；并通过制备腹水并纯化得到大量鼠抗DMO单克隆抗体。

5.根据权利要求4所述一种检测抗麦草畏转基因DMO蛋白的速测试纸，其特征在于：其中DMO重组蛋白是通过将pET30a-DMO阳性质粒转化BL21(DE3)，大量表达并纯化得到DMO重组蛋白。

6.根据权利要求1和2所述，该速测试纸的检测方法如下：

首先将速测试纸垂直插入检测样品中,不超过箭头位置；样品溶液沿样品垫渗透至胶体金标记抗体的试纸条，如果样品溶液中含转基因蛋白DMO，那么DMO蛋白将与金标试纸条上的鼠抗DMO单克隆抗体结合，并与NC膜上的鼠抗DMO单克隆抗体结合，8-10min后，可于观察区中观察到检测区的颜色变化，即出现阳性条带；如果样品溶液中不含转基因蛋白DMO，那么检测区则观察不到阳性条带。而无论样品溶液中是否含转基因蛋白DMO，当样品溶液到达硝酸纤维素膜时，金标试纸条上的鼠抗DMO单克隆抗体均可与控制区包被的抗鼠IgG二抗结合，从而显色；

结果判断规则：

阴性结果(-)，只出现1条C线；

阳性结果(+)：同时出现T线和C线。