[发明专利]ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及医学生物检测技术领域，本发明提供了ZFPM2‑AS1的新用途，具体是在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用，本发明进一步提供了一种利用针对ZFPM2‑AS1的定量PCR检测来进行胰腺相关疾病诊断的试剂盒和检测方法。本发明的试剂盒和检测方法简便，可靠，周期短，特异性高，易于临床推广。

技术领域

本发明涉及医学生物检测技术领域，涉及一种lncRNA在胰腺癌诊断中的应用，尤其涉及lncRNA中的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用。

背景技术

胰腺癌是世界范围内恶性程度最高的肿瘤之一。由于其起病隐匿，早期诊断十分困难，约80％-90％的患者就诊时已发生远处转移，手术切除率仅为15％，且术后生存率难以令人满意。尽管医学技术不断进步，但近十年来其死亡率和生存率并未发生明显改观。此外，胰腺癌发病率在国内外近年来呈现上升趋势。因此，尽早明确诊断是提高胰腺癌患者切除率和生存率的关键。

目前临床常用的胰腺癌诊断实验室指标包括糖链抗原19-9(carbohydrateantigen 19-9，CA19-9)、糖链抗原50(carbohydrate antigen 50，CA50)和糖链抗原242(carbohydrate antigen242，CA242)。CA19-9对中晚期胰腺癌的诊断和预后有较高的参考价值，但对早期的胰腺癌诊断敏感性较低，有文献报道其对2CM的肿瘤阳性率仅为37.5％。CA50和CA242等对胰腺癌早期诊断价值亦不大。

在影像学诊断中，常用的检查有B超、CT、内镜下胰胆管造影、血管造影、磁共振成像(Magnetic resonance cholangiopancreatography,MRCP)和磁共振血管成像(Magneticresonance angiography，MRA)等。B超诊断胰腺癌患者血管受侵袭敏感性、特异性核准确性分别约为80％、91％和85％；电子束CT诊断胰腺癌准确率约为94％，可切除的准确率约为71％；MRCP和MRA联合检查可代替CT，但诊断费用相对较高。

基因诊断是目前研究的热点之一。胰腺癌中约有50-70％的病理存在K-RAS第12位密码子的点突变，是胰腺癌发生的早期事件。有文献报道细针穿刺和胰液标本的检测中，Kras基因突变的阳性率分别为77.3％、91.4％和94.1％，且此突变与肿瘤部位、大小和TNM分期无关，可能有助于胰腺癌的早期发现。

此外，有研究发现，胰腺癌患者胰液中端粒酶活性远高于慢性胰腺炎和良性肿瘤患者，胰液脱落细胞端粒酶活性检测有望成为早期诊断胰腺癌的有效手段；P16基因的甲基化是胰腺癌的发生过程中的另一个早期事件；有研究发现92％的胰腺癌患者存在18q染色体的缺失。上述发现均提示基因变化可能为胰腺癌的早期诊断提供新的分子标志物。

人类基因组研究发现，约65％的基因组DNA转录形成的RNA分子不具备编码蛋白的功能。其中，长度大于200个核苷酸且缺乏完整特异开放阅读框而无编码能力的RNA分子称为长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)。

LncRNA由RNA聚合酶II转录并经可变剪切而成，其表达具有组织特异性。LncRNA最初被认为是基因组转录的“噪声”，是RNA聚合酶作用的副产物，但随后的证据显示lncRNA参与了基因组印迹、染色质修饰、X染色体沉默、核浆运输、转录调控等多种重要的生理机能。近年来，科学家发现lncRNA在肿瘤组织中特异性异常表达，包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌等等。鉴于lncRNA在肿瘤组织中表达的高度特异性和重要的生物学功能，lncRNA可能成为重要的胰腺癌早期诊断分子标志物。

ZFPM2-AS1，位于基因组GRCh38.p7，GENE ID为102723356，经验证为不具有编码蛋白能力的长链RNA。目前有关ZFPM2-AS1的研究极少。既往全转录组测序发现正常组织中ZFPM2-AS1在子宫内膜、膀胱等组织中相对高表达，在胰腺、胃等多种组织中相对低表达(PMID 24309898)。目前尚无ZFPM2-AS1应用于胰腺相关疾病，特别是胰腺癌诊断的文献报道。