[发明专利]一种育性恢复基因及其应用

权利要求书

1.一种育性恢复基因，其特征在于所述育性恢复基因的核苷酸序列选自下列组的序列之一：

（1）如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

（2）在严格条件下能够与（1）中所述序列的DNA杂交的DNA序列；

（3）与（1）或（2）所述序列有至少90%序列相似性，且具有育性恢复功能的DNA序列；

（4）与（1）-（3）之任一所述序列互补的DNA序列；

（5）与（1）-（4）之任一所述序列进行一个或多个碱基的取代、缺失和/或添加且具有育性恢复功能的DNA序列；

（6）编码的氨基酸序列与（1）-（5）之任一所述序列编码的氨基酸序列相同的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的育性恢复基因，其特征在于所述育性恢复基因命名为RF1b，为水稻育性恢复基因。

3.权利要求1所述的育性恢复基因在单子叶作物杂交育种中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为“三系”杂交水稻育种。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为杂交水稻恢复系的选育。

6.一种表达载体，其特征在于所述表达载体为含有如权利要求1所述的育性恢复基因的重组表达载体。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于所述的重组表达载体是通过将权利要求1所述的育性恢复基因插入到载体的Sma I和Kpn I酶切位点之间获得。

8.根据权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于所述表达载体的构建方法如下：

（1）调查不育系F2群体：亲本为福恢7185 & 内香10-A，群体调查数为5；

（2）统计不育株；

（3）卡方分析：水稻育性受两对等位基因的遗传控制，通过卡方分析，判断可育与不育是否符合于15∶1的理论比值，获得F2表2所列分离株数，完成水稻可育性受两位等位基因遗传的适合性测验；

（4）F2花粉育性观察：观察亲本福恢7185 与 内香10-A的花粉，区分可育和不可育花粉的形态；

（5）等位恢复基因RF1b基因的克隆：将材料7185进行恢复基因扩增，获得RF1b基因序列，然后进行克隆比对，以确定获得的基因序列正确性，结果显示在RF1b基因上，7185亲本中与RF1b存在5个碱基的差异，氨基酸存在4个碱基的差异；

（6）水稻RF1b基因的表达载体构建：通过酶切、连接、Tm=58°C扩增，获得将RF1b基因序列插入到载体的Sma I和Kpn I酶切位点之间的表达载体。