[发明专利]一种人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白及其应用，将大量副肿瘤性小脑变性患者、白血病患者作为研究病例，对病例进行基因检测并分析，确定出人的丝氨酸/苏氨酸PKN1的突变蛋白，根据该人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为副肿瘤性小脑变性、白血病疾病的基因诊断提供指引作用，实现病症的诊断与治疗。

技术领域

本发明涉及一种基因工程领域，尤其涉及一种人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白及其应用。

背景技术

PKN1(Protein Kinase N1，蛋白激酶N1)是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶，分子内都存在一个同源的由约270氨基酸残基构成的催化结构区。在细胞信号传导、细胞周期调控等系统中，蛋白激酶形成了纵横交错的网络。这类酶催化从ATP转移出磷酸并共价结合到特定蛋白质分子中某些丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基的羟基上，从而改变蛋白质、酶的构象和活性。

与PKN1相关的疾病包括副肿瘤性小脑变性、白血病等，且在对患有副肿瘤性小脑变性、白血病疾病患者的外周血进行基因测序过程中，发现PKN1发生了突变，因此，对人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变的检测对判断人体是否患有副肿瘤性小脑变性、白血病疾病具有一定的指引作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白及其应用。

本发明技术方案包括：

第一方面，提供一种人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。

第二方面，提供一种人的丝氨酸/苏氨酸PKN1的突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白的核苷酸序列，与人的丝氨酸/苏氨酸PKN1正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。

优选地，所述核苷酸探针为SEQ ID NO:3所示的碱基序列。

第四方面，提供一种特异性识别人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一种用于检测人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的丝氨酸/苏氨酸PKN1蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的丝氨酸/苏氨酸PKN1突变蛋白的抗体的方法，包括：

a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，并室温孵育；

b、使用所述样品稀释液将检测对象的丝氨酸/苏氨酸PKN1蛋白稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的丝氨酸/苏氨酸PKN1蛋白分别加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

d、加入所述酶标二抗，并室温孵育；

e、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

f、加入所述显色液，室温避光孵育，并加入所述终止液终止反应；

g、在酶标仪上测定波长为450nm处的吸光值。

优选地，进一步包括：空白对照实验。