[发明专利]一种提取柠檬苦素和诺米林的方法

权利要求书

1.一种提取柠檬苦素和诺米林的方法，包括：将柑橘属植物的种子脱脂，获得预处理料；采用麦曲复合酶液进行酶解；酶解完成后去除上层清液，获得酶解底料；加入水杨酸钠溶液进行提取，分离提取液；调pH至4.6～5.0，取上清液上大孔树脂，先用25～30%的乙醇溶液洗脱去除杂质，再用85～90%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得浸提物A；将所得浸提物A用二氯甲烷和异丙醇混合溶液加热溶解，过滤去除不溶物，降温，结晶，获得柠檬苦素结晶体；将去除柠檬苦素的滤液减压蒸干获得浸提物B，用乙酸乙酯和乙醇混合溶液加热溶解，过滤去除不溶物，降温，结晶，获得诺米林晶体；

所述麦曲复合酶液的制备方法包括：将麦曲粉碎至80-100目，添加其重量2～3倍的生理盐水或磷酸盐缓冲液，于温度4～6℃条件下浸提8～12h，过滤，即得麦曲复合酶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解条件：pH为6.0～6.5，温度为40～45℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水杨酸钠溶液的浓度为1.5～1.7mol/L；

所述水杨酸钠溶液与所述酶解底料干重的重量比为6～7:1；

所述水杨酸钠溶液的提取温度为52～55℃。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述水杨酸钠溶液的浓度为1.6mol/L；所述水杨酸钠溶液与所述酶解底料干重的重量比为6.5:1；所述水杨酸钠溶液的提取温度为53℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂为XAD-6型。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二氯甲烷和异丙醇混合溶液是由二氯甲烷和异丙醇按体积比1:1.8组成；所述二氯甲烷和异丙醇混合溶液与所述浸提物A干重的重量比为11～12:1；和/或，

所述乙酸乙酯和乙醇混合溶液是由乙酸乙酯和乙醇按体积比5:1组成；所述乙酸乙酯和乙醇混合溶液与所述浸提物B干重的重量比为12～14:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柑橘属植物的种子为柑橘核或柚核。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a）橘核预处理，选取无霉变干燥的橘核，粉碎，过80-100目筛；添加石油醚进行脱脂处理，分离液相，减压蒸馏，回收溶剂，获得副产物橘核提取油；将脱脂底料减压蒸干，获得脱脂橘核预处理料；

b）麦曲复合酶液制备，取酿酒麦曲，粉碎过筛，添加生理盐水或磷酸盐缓冲液浸提，过滤，离心，获得麦曲复合酶液；其中，麦曲粉碎至80-100目，液料比为2～3L/kg，浸提温度为4～6℃，时间为8～12h；

c）酶解处理，取上述脱脂橘核预处理料，添加缓冲溶液，并添加麦曲复合酶液进行保温酶解，完成后去除上层清液，获得酶解底料；其中，液料比为4～8L/kg，麦曲复合酶液添加量为1～5%，溶液的pH为6.0～6.5，温度为40～45℃，时间为6～8h；

d）水助溶剂提取，取上述酶解底料添加所述水杨酸钠溶液，在一定条件下进行提取，分离得提取液；

e）大孔树脂吸附及洗脱，取上述提取液调节pH后离心，取上清液进行XAD-6型大孔树脂吸附，先用低浓度乙醇洗脱去除杂质，再用高浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏，回收乙醇，干燥，获得浸提物A；

f）结晶处理，取浸提物A置于40℃条件下干燥，将干燥后的浸膏添加所述二氯甲烷和异丙醇混合溶液进行加热溶解，过滤去除不溶物，降温，结晶，获得柠檬苦素结晶体；将去除柠檬苦素结晶体的滤液减压蒸干获得浸提物B，取浸提物B添加乙酸乙酯和乙醇混合溶液进行加热溶解，过滤去除不溶物，降温，结晶，所得晶体为诺米林晶体。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤c）中酶解处理条件为：液料比为6～8L/kg，麦曲复合酶液的添加量为2～3%，溶液的pH为6.0～6.5，酶解温度为42℃，时间为7h。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）橘核预处理：选取无霉变干燥的橘核，粉碎，过80～100目筛，备用；

2）脱脂处理：取上述经粉碎的橘核进行脱脂处理，脱脂条件：脱脂溶剂为沸程为60℃～90℃的石油醚，液料比4～6L/kg，温度为60℃水浴，时间为5～8h，脱脂后获得脱脂橘核预处理料；

3）麦曲复合酶液制备：取酿酒麦曲，粉碎，过100目筛；添加pH为6.0～6.5的磷酸盐缓冲溶液浸提，浸提条件：液料比2～3L/kg，温度为4～6℃，时间为8～12h；然后将浸提液依次用4层纱布、滤纸过滤，滤液在10000rpm、4℃条件下离心30min，取离心上清液在无菌条件下过孔径为0.22μm的滤膜，获得麦曲复合酶液；

4）酶解处理：取上述脱脂橘核预处理料添加所述麦曲复合酶液进行酶解，具体为:添加pH为6.0～6.5的磷酸盐缓冲溶液或pH为6.0～6.5的生理盐水，液料比为4～8L/kg，并添加所述麦曲复合酶液，麦曲复合酶液添加量为总体积的1～5%，溶液pH值为6.0～6.5，酶解温度为40～45℃，搅拌提取6～8h，离心去除上层清液，获得酶解底料；

5）水助溶剂提取：将上述酶解底料添加1.5～1.7mol/L的水杨酸钠溶液进行提取，液料比为6～7L/kg，温度为52～55℃，时间为6～8h；提取过程采用三级四罐式逆流提取方式，提取完成后分离提取液；

6）大孔树脂吸附解析：用1mol/L盐酸调节将上述提取液的pH调至4.6～5.0，离心分离沉淀水杨酸；取上清液采用XAD-6型大孔吸附树脂进行吸附；先用2～4倍柱体积的25～30%的乙醇冲洗去除杂质；再用3～6倍柱体积的85～90%的乙醇进行洗脱大孔树脂，收集洗脱液，减压蒸馏，回收乙醇，获得浸提物A；

7）柠檬苦素结晶：将所述浸提物A在40℃条件下干燥，按液料比为11～12L/kg添加二氯甲烷和异丙醇混合溶液，加热至40℃，趁热过滤去除不溶物，降温，于4℃条件下结晶，所得晶体为柠檬苦素结晶体；将去除柠檬苦素结晶体的滤液减压蒸干，获得浸提物B；

8）诺米林结晶：将上述浸提物B，按液料比12～14L/kg的量添加乙酸乙酯和乙醇溶液，加热至40℃溶解，趁热过滤去除不溶物，降温，在4℃条件下结晶，得白色结晶物，所得晶体为诺米林晶体。