[发明专利]一种克氏原螯虾的活体无损取样方法及应用

说明书

本发明公开了一种克氏原螯虾活体无损取样方法及应用，对克氏原螯虾抱卵亲本的受精卵取样，得到取样样品。通过与特定经济性状连锁的分子标记检测，筛选含有目标性状连锁的分子标记的抱卵亲本，进行隔离培育，人工繁殖获得克氏原螯选育一代群体，对该群体继续进行下一代连锁标记的筛选将可能获得目标性状连锁标记的基因频率达到100%的的选育群体。本发明解决了克氏原螯虾分子连锁标记辅助育种中活体无损取样的难题，为克氏原螯虾分子标记辅助育种提供了一条科学可行的途径，可望由此培育出具有优良性状的克氏原螯虾新品种，提高克氏原螯虾养殖经济效益。

技术领域

本发明涉及经济甲壳类分子标记辅助育种技术，具体的说是对具有抱卵习性的虾蟹进行活体无损取样的方法及应用。

背景技术

经济甲壳类的生长通过蜕皮进行，克氏原螯虾一生蜕皮（脱壳）次数达20次以上，在甲壳类中很难运用类似与鱼类的物理的体表标记方法，家系选育在大多数经济甲壳类中很难进行甚至还无法进行，目前经济甲壳类的选育主要通过群体选择育种的方法。传统的选择育种在生长性状方面选育具有优势，但对繁殖、抗病等性状由于遗传力低，选择育种效率很低。针对繁殖、抗病等遗传力低的性状选育，通过寻找与性状连锁的分子标记进行标记辅助选育一直是育种工作者的追求。

对经济甲壳类育种亲本取样用于分子检测时，通常采用断肢取肌肉的方法，此法造成取样目标的伤残，活力下降，部分个体因为感染死亡，因此，该法不适用于虾蟹分子连锁标记辅助育种。大部分克氏原螯虾通常每年的9、10月开始产卵，随着气温降低，抱卵虾钻洞过冬，至第二年开春幼体孵化出来，中间经历近半年，抱卵虾的活力对成活率非常重要。寻找有效的活体无损检测方法对经济甲壳类的分子标记辅助选育非常必要。

发明内容

本发明的目的是为了解决以上现有技术的不足而提供了一种克氏原螯虾的活体无损取样方法及应用。

本发明采用的技术方案如下：

一种克氏原螯虾活体无损取样方法，包括以下步骤：

步骤1，挑选克氏原螯虾抱卵亲本，选择个体健壮，生长良好，附肢齐全的克氏原螯虾抱卵亲本；

步骤2，将克氏原螯虾固定螯足，暴露腹部受精卵，对每个抱卵虾在螯足底部进行套环标记，对标记好的每个个体分别在抱卵虾腹部抱卵区前、中、后三个部分采集不同发育期的受精卵各5-10个，合并于一个采样管中。

进一步，所述的克氏原螯虾活体无损取样方法，步骤2中对每个抱卵虾在螯足底部进行套环标记采用带数字编号的自锁式尼龙扎带进行。

进一步，所述的克氏原螯虾活体无损取样方法，步骤2中的采样管为Eppendorf管。

以上所述的克氏原螯虾活体无损取样方法得到的不同发育期受精卵在分子育种中的应用。

进一步，所述的应用，分子育种方法包括以下步骤：

（1）对每个抱卵虾的不同发育期的受精卵提取DNA，进行与目标性状连锁的分子标记检测；

（2）筛选出含有目标性状连锁标记的抱卵虾，进行单独培育，孵化，幼体培育，养殖，获得选育一代群体；

（3）对选育一代群体按上述（1）-（2）的方法再进行一轮检测筛选，对获得的含目标连锁标记的纯合亲本做为选育二代亲本；对选育二代亲本进行单独培育，孵化，幼体培育，养殖，获得选育二代群体，直至该群体含有目标连锁标记的基因频率达到100%。

进一步，所述的克氏原螯虾活体无损取样方法应用于中华绒螯蟹、日本沼虾、罗氏沼虾的分子育种的活体无损取样中。

与现有技术相比，本发明具有以下的优点：