[发明专利]一株地衣芽孢杆菌及其在防治甜瓜枯萎病中的应用

说明书

本发明公开了一株地衣芽孢杆菌及其在防治甜瓜枯萎病中的应用。该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株LT4‑3，是从山东省济宁市运河河泥中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14745。试验结果表明：地衣芽孢杆菌菌株LT4‑3可湿性粉剂防治甜瓜枯萎病效果显著，防治效果达到74.31％，且甜瓜长势良好，无药害产生。

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域。具体而言，本发明涉及一株地衣芽孢杆菌及其在防治甜瓜枯萎病中的应用，以及采用该地衣芽孢杆菌制备的生物防治制剂。

背景技术

甜瓜又称香瓜、熟瓜、哈密瓜等，在我国栽培历史悠久，因甜瓜果肉营养价值较高，具有消暑利尿、保护肝脏、补充维生素等功能，再加上色香味俱全，使得甜瓜深受大众喜爱。甜瓜作为一年生蔓生植物，在世界范围内广泛栽培，我国甜瓜产量居各国之首。近年来，随着甜瓜种植密度及复种指数的增加，甜瓜病虫害发生的频率也越来越高，其中甜瓜枯萎病则是影响甜瓜农业生产的主要病害之一。甜瓜枯萎病又称死秧、死藤、萎蔫病、蔓割病，露地和保护地栽培均可发生，是甜瓜生产上重要的真菌病害，常引起瓜秧枯萎死亡。甜瓜枯萎病由尖孢镰刀菌甜瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.melonis)引起。甜瓜枯萎病是典型的土传真菌病害，从苗期到成株期均可发病。其中，开花坐果期发病最重，常引起瓜秧枯萎死亡。

目前防治甜瓜枯萎病的主要方法还是化学防治，由于长期用药，使甜瓜枯萎病病原菌产生抗药性，最终导致防治效果不理想，再加上化学药剂的大量使用对甜瓜质量安全与环境造成许多负面影响，而生物防治具有对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性等优点，因此甜瓜枯萎病的绿色无公害生物防治越来越多的受到人们关注。

地衣芽孢杆菌为芽孢杆菌属内菌株，是目前得到广泛应用和研究，并具有巨大潜在开发价值的菌株之一，菌体能产生抗菌活性物质，具有独特的生物夺氧作用机制，抑制病原菌的生长繁殖，同时能够产生多种促生相关物质，促进植物生长。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于高效防治甜瓜枯萎病的新的微生物——地衣芽孢杆菌LT4-3。本发明的地衣芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产量大、抗逆性强，在植物(尤其是甜瓜)表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：本发明所提供的菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株LT4-3，是从山东省济宁市运河河泥中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNo.14745。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB(Luria-Bertani)培养基上该菌株形状为杆状，鞭毛特征明显，单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形，中生或近中生，抱囊不膨大。

本发明地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)菌株LT4-3的培养方法或繁殖方法包括：

(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。

(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。