[发明专利]一种网织红细胞检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种网织红细胞检测试剂盒，包括：染色液和足够量的稀释液，所述染色液包括特异性核酸染料和有机溶剂，所述特异性核酸染料为式3所示的化合物：所述稀释液包括缓冲剂、至少一种表面活性剂和水，所述检测试剂盒的pH值为7‑11；所述表面活性剂包括两性表面活性剂，所述两性表面活性剂为咪唑啉型式4所示的化合物；同时公开了该试剂盒用于制备网织红细胞含量的测定试剂的应用。本发明所用的染料很容易进入被稀释液处理过的细胞，与分子内部与核酸物质进行结合，染料安全毒性小，使用两性表面活性剂跟非离子表面活性剂处理细胞，经染料染色后，RET成熟程度区分界限明显，结果测定准确，同时还可以测定血小板的含量。

技术领域

本发明属于血细胞分析领域，主要涉及一种网织红细胞检测试剂及其应用。所述网织红细胞检测试剂盒采用了新型的无毒、高敏感性、高稳定性的核酸染料以及稀释液，可以准确的对网织红细胞进行分类。

背景技术

网织红细胞是红细胞的一种，介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，其胞质中残存少量嗜碱性物质RNA，RNA含量越高，网织红细胞越幼稚。正常人的外周血中都是成熟的红细胞及少量网织红细胞(成年人：百分率，0.5％-1.5％，新生儿：百分率，3.0％-6.0％)，因此临床检验可以根据网织红细胞的成熟度及其含量判断病人的信息，主要用于判断贫血类型。

目前，网织红细胞的检测方法主要有二种：一种是手工法，一种是仪器法。手工法：由于网织红细胞胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后，胞质中可见蓝或蓝绿色枝点状甚至网织状结构，从而进行区分。仪器法：主要利用荧光染料与网织红细胞中的RNA结合，当FCM发出的激光照射于细胞上时，细胞发射出特定颜色的荧光，根据荧光的强弱，测定RNA含量，从而精确测定Ret占成熟红细胞的百分比(RET％)。还可根据激光照射后发射出的荧光强度或光吸收量大小、光散射量多少等参数的比例关系对RET成熟程度进行分群，将其划分为低荧光强度网织红细胞(LFR)、中荧光强度网织红细胞(MFR)、高荧光强度网织红细胞(HFR)。荧光强度越高，网织红细胞越幼稚。手工法，费时较长，效率低，成本较高。因此，仪器法成为临床上的主要需求。

目前，已有多家厂家对仪器法进行了研究，取得了相应的进展，现有相关技术如下：

现有技术一：中国专利，公开号CN 1172953A，公开了一种用网织红细胞染色的花青素类型的染料如式1

及使白细胞染色的特异性染料。阳离子表面活性剂做促染剂，在一定缓冲体系下进行测定。此方法不足之处在于多种染料对环境及人体有伤害，同时对异常淋巴细胞血液中，白细胞跟网织红细胞区分度不是很明显。另外，RET成熟程度区分界限不是很明显。

现有技术二：中国专利，公开号CN 101344472A，公开了一种荧光染料如式2

及缓冲剂、促染剂和渗透压调节剂。此方法不足之处在于此染料对人体有一定的伤害，同时RET成熟程度区分界限不是很明显。

现有技术三：美国专利，US 5821127公开了一种用聚次甲基兰作为特异性染料，阳离子和两性表面活性剂做促染剂。此方法不足之处在于次染料对红细胞有非特异性染色，背景强度较大，且RET成熟程度区分界限不是很明显。

综上所述，现有的发明专利中还存在许多不足之处，比如染料的危害，稳定性，对红细胞有非特异性染色，RET成熟程度区分界限不是很明显，试剂成本高，制备复杂等，因此需要对现有技术进一步改进。

发明内容

本发明的目的在于：鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种网织红细胞检测试剂盒，此试剂盒中的核酸染料具有无毒、高敏感性、高稳定性的特点。