[发明专利]一种用于法医学个体识别的35个插入/缺失位点的试剂盒

说明书

本发明属于法医学新技术研究领域，具体涉及公开一种适用于法医学个体识别研究新的35个插入/缺失（Insertion/Deletion，InDel）位点的复合扩增分型检测体系试剂盒及检测方法。采用四种荧光物质（FAM、HEX、TAMRA和ROX）对35个InDel位点的引物分别进行荧光标记，实现35个位点在同一扩增体系中进行复合扩增，并同步进行检测。本发明提供的InDel位点是长度多态性分子遗传标记，可采用毛细管电泳的方法进行分型，有利于在基层法医单位中应用推广。本发明所述的试剂盒兼容各类生物检材、灵敏度高、特异性强，操作简便快捷。35个InDel位点在无关健康个体中具有较高的累积个体识别率，能够满足法医学个体识别的需要，为法医学实践提供新且有效的检测试剂。

技术领域

本发明属于法医学新技术研究领域，具体涉及公开一种适用于法医学个体识别研究新的35个插入/缺失（Insertion/Deletion，InDel）位点的复合扩增分型检测试剂盒。

背景技术

短串联重复是2-6bp的核酸序列组成的重复单元所形成的遗传多态性，因其多态性高的优势，被广泛应用于法医学研究。但是，STR扩增片段多在300bp以上，不利于法医学中降解检材的分型检测。

插入/缺失多态性位点是由于基因组中插入或缺失不同长度的DNA片段所形成的遗传多态性位点。InDel位点在人类基因组中分布广泛，平均每7.2kp就包含一个InDel位点。InDel位点具有候选位点多、稳定性好、多态性较高、种属特异性强、检测灵敏度好、分型操作简单、基因分型结果精准以及突变率低（10^-8）等优势，成为法医物证学研究的新热点。

目前国际上常用的InDel分型检测试剂盒Investigator^® DIPplex主要是针对欧美人群研发，这些位点在国内群体中多态性程度偏低，多数位点在国内群体中具有较低的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于国内群体法医学个体识别研究的35个InDel位点的复合扩增检测试剂盒。

为了实现本发明，我们采用了以下技术方案：

1)筛选用于国内群体法医学个体识别研究的InDel位点。我们基于千人数据库中的中国群体（北京汉族、南方汉族和傣族）对InDel位点进行甄选和法医学效能的评估，位点的筛选原则为：a. InDel位点位于内含子区域；b. InDel位点位于不同染色体上或在同一条染色体上至少相距10Mb；c. InDel位点在东亚群体的插入或缺失等位基因的频率分布在0.4-0.6之间；d. InDel位点在国内三个群体（北京汉族、南方汉族和傣族）中均符合Hardy-Weinberg平衡并处于连锁平衡状态。本发明选择rs3028455、rs2308194、rs3067194、rs10629077、rs5846092、rs3082950、rs1160964、rs4210、rs4024564、rs3040095、rs3839237、rs2307433、rs1610945、rs16678、rs25570、rs16646、rs3066543、rs3029940、rs5882232、rs3057689、rs66502133、rs3831219、rs34224758、rs5803454、rs3054057、rs61681053、rs10556291、rs10637537、rs10609615、rs139995318、rs141749783、rs4189、rs6480、rs5840847和rs371194629共35个InDel位点进行分型检测。

2)35个InDel位点的复合扩增体系的构建。本发明采用Primer5.0软件对各位点进行引物设计，同时通过对PCR引物的优化结合四色荧光物质的调配，实现35个InDel位点在同一反应体系中并行检测。