[发明专利]一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75％的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；

步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8～10天，得到大麻无菌苗茎尖；

步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂7～8g/L，pH 5.7～5.9，培养温度为23～25℃，光照强度1800～2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15～20天，得到大麻茎尖再生植株；

步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的MS培养基或含激素的1/2MS培养基，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH 5.8，培养温度为23～25℃，光照强度2300lux，每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为20～30天，得到生根的植株；

步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1500～1650mg/L的NH₄NO₃、120～170mg/L的KH₂PO₄、1200～1500mg/L的KNO₃、350～400mg/L的CaCl₂·2H₂O、300～350mg/L的MgSO₄·7H₂O，所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂O、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂O，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，所述的有机成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1～0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/L的烟酸；

步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH₄NO₃、130mg/L的KH₂PO₄、1250mg/L的KNO₃、370mg/L的CaCl₂·2H₂O、330mg/L的MgSO₄·7H₂O，所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂O、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂O、0.25mg/L的Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂O和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂O，所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸，激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。