[发明专利]一种生物素化的insulin抗原及其生物素化工艺

权利要求书

1.一种生物素化的insulin抗原，其特征在于，具有式1所示结构：

其中，圆形表示胰岛素，1≤x≤n，n表示胰岛素上氨基的数目，x和n均为整数；椭圆代表大分子蛋白HBA、BSA、OVA或酪蛋白，y+z≤m，z≥10，y≥1，m表示大分子蛋白上的氨基数目，y、z和m均为整数，若z/x为非整数，则z/x取整数且在整数位上加1。

2.权利要求1所述生物素化的insulin抗原在制备酶联免疫试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒为糖尿病免疫检测试剂盒。

4.权利要求1所述生物素化的insulin抗原的制备工艺，其特征在于，包括：步骤1、将insulin与S-乙酰硫基乙酸琥珀酰亚胺酯室温反应，透析纯化后获得insulin-SH-P：n表示insulin上氨基数目，1≤x≤n，x和n均为整数；

insulin-SH-P与盐酸羟胺的PBS室温反应去掉保护基团，经葡聚糖凝胶柱纯化后形成含活性巯基基团的insulin-SH，备用；

大分子蛋白、Sulfo-N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸钠盐和琥珀酸亚酰胺-十二聚乙二醇-生物素室温反应，经过PBS透析纯化获得Biotin-大分子蛋白-SMCC；m表示大分子蛋白上的氨基数目，2≤y+z≤m，y、z和m均为整数

步骤2、将备用的insulin-SH和Biotin-大分子蛋白-SMCC混合室温反应，经过葡聚糖凝胶柱纯化后获得Biotin-大分子蛋白-Insulin，具有式1所示结构，作为生物素化的insulin抗原；

其中，圆形表示胰岛素，1≤x≤n，n表示胰岛素上氨基的数目，x和n均为整数；椭圆代表大分子蛋白，2≤y+z≤m，m表示大分子蛋白上的氨基数目，y、z和m均为整数，若z/x为非整数，则z/x取整数且在整数位上加1。

5.一种糖尿病抗体谱检测试剂盒，其特征在于，包括包被有糖尿病自身抗原的蛋白芯片，蛋白芯片上包被的糖尿病自身抗原通过将其生物素化并和亲和素化的蛋白芯片相互结合的方式包被在蛋白芯片上，所述生物素化的糖尿病自身抗原包含权利要求1所述生物素化的insulin抗原。

6.根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于，所述糖尿病自身抗原选自IA-2、GAD、IC、CPH、ZnT8、insulin中的一种或两种以上。

7.根据权利要求5或6所述试剂盒，其特征在于，所述糖尿病自身抗原采用CB缓冲液或Tris缓冲液为抗原稀释缓冲液进行包被。

8.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述蛋白芯片还包括阴性质控点、阳性质控点、样品质控点、酶标质控点、参考曲线点以及位置参考点中的一个或两个以上。

9.根据权利要求5-6任意一项所述试剂盒，其特征在于，所述蛋白芯片还包括阴性质控点、阳性质控点、样品质控点、酶标质控点、参考曲线点以及位置参考点中的一个或两个以上。

10.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，还包括酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液。

11.根据权利要求5-6、8任意一项所述试剂盒，其特征在于，还包括酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液。

12.根据权利要求9所述试剂盒，其特征在于，还包括酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液。