[发明专利]一种人的过硫双加氧酶突变蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种人的过硫双加氧酶突变蛋白及其应用，通过将大量肺癌与乙基丙二酸脑病患者作为研究病例，对病例进行基因检测并分析，确定出人的过硫双加氧酶的突变蛋白，根据该人的过硫双加氧酶的突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为肺癌与乙基丙二酸脑病的基因诊断提供指引作用，并为相关疾病的诊断和治疗提供一定的理论基础。

技术领域

本发明涉及一种基因工程领域，尤其涉及一种人的过硫双加氧酶突变蛋白及其应用。

背景技术

过硫双加氧酶在线粒体基质里硫化氢分解代谢过程中起着关键作用；一旦过硫化物被转移到亲硫受体，过硫双加氧酶消耗分子氧催化过硫化物的氧化；通过代谢硫化氢保持线粒体中的代谢平衡。

人的过硫双加氧酶发生突变会对人类健康造成严重影响。在对某些疾病，尤其是肺癌与乙基丙二酸脑病患者的外周血进行基因测序的过程中，均发现患者的过硫双加氧酶发生了突变，因此，对人的过硫双加氧酶突变的检测对判断人体是否患有相关疾病具有一定的指引作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种人的过硫双加氧酶突变蛋白及其应用。

本发明技术方案包括：

第一方面，提供一种人的过硫双加氧酶突变蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一种人的过硫双加氧酶突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQID NO:2所示。

第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的过硫双加氧酶突变蛋白的核苷酸序列，与人的过硫双加氧酶正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。

优选地，所述核苷酸探针为SEQ ID NO:3所示的碱基序列。

第四方面，提供一种特异性识别人的过硫双加氧酶突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一种用于检测人的过硫双加氧酶突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的过硫双加氧酶蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的过硫双加氧酶突变蛋白的抗体的方法，包括：

a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

b、使用所述样品稀释液将检测对象的过硫双加氧酶蛋白稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的过硫双加氧酶蛋白分别加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

d、加入所述酶标二抗，并室温孵育；

e、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

f、加入所述显色液，室温避光孵育，并加入所述终止液终止反应；

g、在酶标仪上测定波长为450nm处的吸光值。

优选地，进一步包括：空白对照实验。