[发明专利]一种治疗性HPV核酸疫苗在审
| 申请号： | 201810186910.1 | 申请日： | 2018-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN108424925A | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 庞以芹;谢亦武;吴必杰;魏勇 | 申请（专利权）人： | 江苏润洁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C07K19/00;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 223699 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微环 重排 制备 宿主细胞基因组 表达外源基因 生物医药领域 产业化生产 核苷酸序列 病毒载体 工程细菌 核酸疫苗 免疫原性 致癌能力 制备工艺 重要意义 剪切 序列区 治疗性 扩增 整合 质粒 突变 疫苗 诱发 上游 治疗 安全 | ||
1.HPV E6/E7核苷酸片段，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。
2.融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求1所述的HPV E6/E7核苷酸片段编码得到。
3.一段包含权利要求1所述HPV E6/E7片段的DNA重组片段，其特征在于，包含信号肽序列区、Flt3L序列区、权利要求1所述的HPV E6/E7片段，其中信号肽序列区、Flt3L序列区、权利要求1所述的HPV E6/E7片段依次连接；
所述Flt3L序列区的的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
4.根据权利要求3所述的DNA重组片段，其特征在于，所述DNA重组片段还包含连接区，所述连接区连接Flt3L序列区和权利要求1所述的HPV E6/E7片段。
5.根据权利要求4所述的DNA重组片段，其特征在于，所述连接区的核苷酸序列如SEQID NO:5所示。
6.根据权利要求3所述的DNA重组片段，其特征在于，还包含标签区，所述标签区与所述的HPV E6/E7片段连接并位于其下游。
7.根据权利要求6所述的DNA重组片段，其特征在于，所述标签区的核苷酸序列如SEQID NO:6所示。
8.根据权利要求3所述的DNA重组片段，其特征在于，所述DNA片段尾端还包含终止密码子。
9.根据权利要求3所述的DNA重组片段，其特征在于，所述信号肽序列区为选自组织型纤溶酶原激活物tPa、HSV gDs及生长激素的分泌信号肽对应的核苷酸序列中的一种或多种。
10.融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求3所述的DNA重组片段编码得到。
11.重组微环DNA，其特征在于，所述微环DNA包含权利要求3所述的DNA重组片段。
12.权利要求11所述的重组微环DNA的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)设计两端加BglII和SalI酶切位点的权利要求3的HPV E6/E7重组片段，并合成，得目的基因；
2)用BglII和SalI同时双酶切步骤1)的目的基因和ZY781载体，回收，连接，即得亲本质粒；
3)用上述亲本质粒转化大肠杆菌ZYCY10P3S2T，过夜培养，质粒酶切及测序验证插入正确的片段；
4)将上述菌液接入含kana的TB培养液中，37℃培养后与Minicle Induction Mix按等体积混合，于32℃反应5-8h，反应结束后，离心提质粒，即获得含有权利要求3所述DNA片段的重组微环DNA；
其中，步骤4)中Minicle Induction Mix的制备方法为：向100ml LB培养基中加入1MNaOH 4ml和20％阿拉伯糖200μl，混合后经0.22μm滤膜过滤。
13.权利要求11所述的重组微环DNA在用于制备治疗HPV感染的药物的用途。
14.权利要求1所述的核苷酸片段在用于制备治疗HPV感染的药物的用途。
15.权利要求3所述的DNA重组片段在用于制备治疗HPV感染的药物的用途。
16.权利要求2所述的融合蛋白在用于制备治疗HPV感染的药物的用途。
17.权利要求10所述的融合蛋白在用于制备治疗HPV感染的药物的用途。
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