[发明专利]一种融合蛋白和多克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种肿瘤特异性表达的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或其编码序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种多克隆抗体，其抗原为融合蛋白或融合蛋白中的至少一段多肽；本发明还公开了所述多克隆抗体的制备方法和应用。本发明中首次发现的融合蛋白ASTN2‑PAPPA是恶性肿瘤中出现的融合蛋白，研究表明其与肿瘤的生长、转移有密切关系，本发明专门设计的ASTN2‑PAPPA多克隆抗体可以鉴定该融合蛋白，为研究该融合蛋白的蛋白水平和分子机制提供了可靠的工具；ASTN2‑PAPPA作为与肿瘤发生发展关系密切的融合蛋白，在肿瘤的诊断和治疗方面可作为分子标志物和治疗靶点，本发明所提供的针对ASTN2‑PAPPA融合蛋白的多克隆抗体为将来的诊断和抗体治疗提供了可能。

技术领域

本发明涉及抗体制备技术领域，尤其是一种融合蛋白和多克隆抗体及其应用。

背景技术

癌症是人类头号杀手，以往癌症予人感觉为不治之症，但随着医学的发展，通过手术、放射治疗、化疗及标靶药物治疗等均能有效延长病人寿命。癌症发生的原因很多，危险因素也多种多样，如化学因素、物理因素、生物因素等。

目前在癌症研究发现融合蛋白不仅在肿瘤发生中起重要作用，而且具有巨大的转化意义，可以作为治疗靶点和分子标志物。融合蛋白产生的机制包括：1)各种染色体变化(包括DNA插入、扩增、缺失、重排、转位)造成的融合基因所产生的融合蛋白；2)各种RNA异常剪接导致的融合RNA翻译成的融合蛋白。

最著名的融合蛋白是由融合基因费城染色体产生的BCR–ABL蛋白。这一发现始于上个世纪60年代,在慢性粒性白血病病人中发现的费城染色体，拉开了融合蛋白与癌症的研究序幕，BCR–ABL融合基因极其蛋白存在于95％慢性粒细胞白血病中的，BCR–ABL不仅成为CML的重要诊断标志物，而且其抑制剂格列卫(Gleevec)把致死率曾经极高的CML的治愈率提高了61％。

目前已经在多种癌症中发现了融合蛋白，并且开发了针对融合蛋白的临床药物。融合蛋白可促进肿瘤的发生和发展，并可作为肿瘤的分子诊断和治疗靶标。随着RNA深测序技术的发展,越来越多的融合RNA及其融合蛋白产物逐渐被发现。目前融合蛋白的检测方法主要有：

1)在DNA水平检测融合基因。荧光原位杂交(FISH)是目前检测肿瘤组织中染色体重排最有效的诊断技术之一。已获得FDA批准，被作为临床实验中检测ALK融合基因的金标准，该技术也是ROS1融合基因临床检测的常用方法。例如，FISH断裂探针为正常ALK或ROS1基因的5'-和3'-端不同标记有绿色和红色荧光的探针，当存在基因重排时，绿色和红色信号因重组融合伙伴的置换而“断裂”显现为分离较远的单色信号。作为一种常规的筛选方法，FISH检测成本相对较高，需要专用设备，试剂昂贵，处理时间较长，检测结果难以判读、主观性强等不足，在实际应用上还存在一些限制。

2)在RNA水平检测融合RNA。RT-PCR技术简单快速准确，可以明确基因融合型，适用于微量组织标本，因而RT-PCR技术在筛选和确认肺癌基因重组中具有独特的优势。但RT-PCR对组织中DNA质量要求较高，结果常常出现假阳性。

3)在蛋白水平检测融合蛋白。部分融合基因可编码蛋白质，对肿瘤的发生发展起到重要的作用。有的融合基因及其编码的蛋白质可以作为指示癌症发生和发展的标志物。所以，在癌症的融合基因的研究过程中，需要同时研究其基因水平和蛋白水平的表达。融合基因作为一个生物体内全新的产物，其编码的蛋白质也是前所未有的，所以一个特异性针对融合基因编码蛋白质的抗体对于融合基因的研究具有极其重要的意义。免疫组织化学技术(IHC)是用探针标记的抗体定位组织样本中特异性抗原。该技术已广泛应用于临床，而且成本低、简便快速、准确。新近采用高敏感高特异抗体所进行的IHC染色方法检测ALK、ROS1等基因的重排，结果发现与断裂FISH技术相比，准确度可达到100％，特异性高达99％。

由此可见，融合蛋白特异性抗体对于推动融合蛋白研究的发展有着不可替代的作用。

发明内容