[发明专利]缺血性脑损伤动物模型的抗神经损伤方法

说明书

本发明公开了一种缺血性脑损伤动物模型的抗神经损伤方法，包括以下步骤：步骤1、缺血性脑损伤动物模型的建立方法；步骤2、进行地龙素给药实验；步骤3、进行行为学测试、梗死体积的测量，观察地龙素对缺血性脑损伤小鼠缺血半影区组织与血管新生相关的VEGF、CD34表达的影响；观察地龙素对局部脑缺血损伤小鼠PI3K‑AKT信号通路的相关因子VEGF、PI3K、AKT蛋白表达的影响。本发明通过动物实验确定了地龙素对缺血性脑损伤动物的神经保护效果的最佳剂量，通过可靠的测试指标确定了地龙素可用于缺血性脑损伤的神经保护。

技术领域

本发明属于抗神经损伤技术领域，尤其涉及一种缺血性脑损伤动物模型的抗神经损伤方法。

背景技术

中风是一种常见病，多发病，死亡率和致残率都很高，目前临床上还未发现理想的治疗方法。抗血栓西药虽疗效确切，但不良反应明显，作用靶点单一且病情易反复。中药地龙具有毒副作用小，作用靶点多元等优点。目前缺血性脑损伤引起的神经损伤的治疗药物或方法并没有取得令人满意的疗效，针对这一现状，本发明提出了一种中药地龙素作为缺血性脑损伤的抗神经损伤药物，疗效好，克服使用西药的弊端，并能为后期研究应用多功效多靶点的药物提供科学基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种缺血性脑损伤动物模型的抗神经损伤方法，旨在解决上述背景技术中提出的问题。

本发明是这样实现的，

一种缺血性脑损伤动物模型的抗神经损伤方法，包括以下步骤：

步骤1、缺血性脑损伤动物模型的建立方法

以6-8周龄小鼠为实验动物，实验小鼠经麻醉后，正中剪开头皮，暴露颅骨，将双面刀片黏在颅骨上，拧紧螺丝将头骨固定在自制的钢板上，以Bregma点后1mm，侧2mm为中心，将2×2mm颅骨区域磨薄头骨直至有小血管可见，尾静脉注射孟加拉红溶液，立即用绿色光束照射磨薄区域的小血管4min 15sec，然后缝合头皮，用带有反馈控制的加热板保温至苏醒，放回鼠笼；

步骤2、给药方法

a.假手术组：给予生理盐水，每天一次，连续4周；

b.经步骤1处理的模型组：给予生理盐水，每天一次，连续4周；

c.经步骤1处理的模型小鼠给药组：每只小鼠以地龙素40-80mg/mL，灌胃，每天一次，连续4周；

步骤3、观测指标

a.观察经步骤2处理的小鼠的运动平衡能力，进行行为学测试，包括疲劳转移棒测试和前肢抓力测试；

b.梗死体积的测量:将做完行为学测试的小鼠在术后72h进行腹腔麻醉，断头取脑进行TTC染色后测量梗死体积；

c.观察地龙素对缺血性脑损伤小鼠缺血半影区组织与血管新生相关的VEGF、CD34表达的影响；

d.观察地龙素对局部脑缺血损伤小鼠PI3K-AKT信号通路的相关因子VEGF、PI3K、AKT蛋白表达的影响。

优选地，步骤2c中，所述经步骤1处理的模型小鼠给药组：每只小鼠以地龙素80mg/mL，灌胃，每天一次，连续4周。

优选地，步骤3b中，所述腹腔麻醉时使用的麻醉剂为15％的氨基甲酸乙酯0.4ml。

优选地，步骤3b中，所述梗死体积的计算公式为梗死体积＝对侧大脑的体积-同侧未损伤大脑的体积。

本发明还提供了地龙素用于缺血性脑损伤的神经保护的用途。

相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：