[发明专利]治疗性HPV卵黄抗体及其应用

说明书

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种HPV E6/E7重组微环DNA的卵黄抗体及其在治疗HPV感染的应用。其中HPV E6/E7重组微环DNA包含HPV16的E6/E7基因重组片段以及信号肽序列，将其作为核酸抗原直接免疫产蛋鸡获得本发明的卵黄抗体。DNA核酸抗原肌肉注射免疫产蛋鸡所获得的卵黄抗体(IgY)的生物活性远超一般技术(皮下注射蛋白抗原)制备的卵黄抗体，抗体效价更高，特异性更强。本发明的卵黄抗体可用于制备治疗HPV感染的药物，阴道用药对HPV阳性患者输入高活性抗HPV抗体，结合纳米脂质体的方法，抗体跨膜进入细胞，直接中和细胞内的HPV病毒的E6/E7蛋白。因此本发明的卵黄抗体对于治疗HPV感染以及预防宫颈癌有重要意义。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种HPV E6/E7重组微环DNA的卵黄抗体及其在治疗HPV感染的应用。

背景技术

宫颈癌占女性妇科恶性肿瘤的第二位，现已成为威胁女性健康的重要疾患，中国每年死于宫颈癌的人数将近5万，宫颈癌的病因研究一直为国内外学者所重视，研究发现引起宫颈癌的关键是HPV的感染。HPV属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属，是球形、双链环状DNA病毒。HPV主要通过直接或间接接触污染物品或通过性传播感染人类。HPV的感染有宿主特异性和组织特异性，只能感染人类的皮肤和粘膜受损的基底细胞。

HPV经损伤的宫颈粘膜首先感染基底细胞层，病毒以少量游离DNA状态潜伏在基底细胞内，以实现免疫逃逸。当基底细胞不断分化、成熟、向粘膜表层迁移，HPV病毒就大量增殖。随着粘膜表层上皮细胞的凋亡，病毒颗粒大量释放到上皮表面，作为新的感染源可进一步加重感染。长期HPV持续感染导致宿主细胞相关基因表达发生变化，可逐渐发展为宫颈癌。

HPV至今已鉴定明确的大约有200多个亚型，根据其致病和预后不同又可分为高危型HPV(HR-HPV)和低危型HPV(LR-HPV)，其中HR-HPV 15种，包括HR-HPV16、18、31、33、35、39、45、5l、52、56、53、58型等，感染后可引起癌前病变和宫颈癌。其中HPV16和HPV18是最主要的流行株。

HR-HPV的持续感染，使HR-HPV DNA与宿主宫颈基底膜细胞DNA整合，引起HR-HPVE2片段(E2基因参与转录调节，E2蛋白是主要的病毒转录因子)的缺失，E2片段的缺失加快宫颈病变的进展，增加恶性转化的可能性，主要原因是E2片段的缺失引起HPV E6/E7mRNA表达，E6/E7蛋白促进﹑维持HR-HPV DNA与宫颈基底细胞DNA整合，使宫颈基底细胞异常增生，HPV E6/E7mRNA干扰正常细胞周期，导致细胞基因组不稳定，转录生成的E6/E7蛋白，可以灭活抑癌蛋白P53、RB和P21等，使正常的宿主细胞向恶性方向转化，E6/E7蛋白可以使HPV逃避宿主的免疫监视以及干扰机体免疫反应。E6/E7蛋白为癌蛋白，因此可以针对E6/E7蛋白开发治疗HPV感染的药物。

卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,IgY)为通过免疫注射产蛋鸡，由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗。DNA核酸抗原肌肉注射免疫产蛋鸡所获得的卵黄抗体(IgY)的生物活性远超一般技术(皮下注射蛋白抗原)制备的卵黄抗体，抗体效价更高，特异性更强。而目前尚无核酸抗原免疫获得的HPV E6/E7卵黄抗体用于治疗HPV感染的先例。

目前预防性疫苗Gardasil/Cervarix可有效预防HPV感染，但对于已有HPV感染或癌前病变者并无明显治疗作用，故有必要开发针对HPV感染的治疗性药物。

因此开发一种核酸抗原免疫获得的HPV E6/E7卵黄抗体以及其在治疗HPV感染中的应用，对于治疗治疗HPV感染和预防宫颈癌具有重大意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种包含HPV E6/E7片段的重组DNA片段，其消除E6/E7致癌能力，并增强了E6/E7的免疫原性。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：