[发明专利]一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基及制备方法

说明书

一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基及制备方法，由以下组分制成，α‑MEM/HG‑DMEM培养基、胎牛血清5～50％体积百分比、谷氨酰胺0.5～10％体积百分比、吲哚美辛100～400μM体积、胰岛素0.1～20μg/ml浓度、1‑甲基‑3‑异丁基黄嘌呤10～200μM体积、地塞米松10～200nM体积、精胺0.1～20μM体积。培养皿清洁；配备培养基，按配方在培养皿中配制α‑MEM/HG‑DMEM培养基；混合原料；过滤混合液。本发明可高效并特异地诱导包括人骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞以及脂肪间充质干细胞在内的多种组织来源人间充质干细胞向成脂细胞的定向分化，缩短人间充质干细胞成脂分化诱导时间，制备方法简便，使用方便，可实现稳定，高效的人间充质干细胞成脂诱导分化。

技术领域

本发明涉及培养基技术领域，具体为一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基及制备方法。

背景技术

人体多种组织如骨髓、脐带，脂肪等中存在有间充质干细胞(mesenchymal stemcell,MSCs)，该类多能干细胞可通过分离采集，在体外大量扩增培养，并在特定条件下，发挥向脂肪、骨、软骨、肌、肝脏、神经、皮肤等多种类型组织细胞分化的潜能，近年来研究还发现，该类间充质干细胞参与机体免疫系统功能条件，促进组织损伤修复。基于上述特性，大量研究已开始关注间充质干细胞疗法在多种组织再生及器官功能损伤修复中的应用潜能。其中，基于间充质干细胞定向成脂分化特性的整形应用研究备受关注，并已在动物及临床前期的研究中取得令人满意的疗效，临床转化及应用市场潜能巨大。

脂肪组织在机体中参与能力代谢，器官保护及塑性等生理功能的发挥。临床外科早已利用自体脂肪来进行面部、胸部，臀部等部位的整容及塑性治疗，然而，该类操作需要进行自体外科取脂，导致组织创伤，并引起手术操作后的疼痛及相关并发症。因此，大量研究尝试利用外源化学物质替代自体脂肪，进行相关整容塑性治疗，虽疗效显著，但化学材料引起的局部免疫排斥，及降解后的手术再替换都会导致二次损伤及相关并发病，为病人带来不必要的痛苦。近年来发现，人体中的脂肪细胞是由间充质干细胞分化得来，定向成脂分化已成为间充质干细胞功能鉴定的一项必备指标。同时，人们开始尝试通过诱导自体间充质干细胞定向成脂分化，为外科整容及塑性操作提供一定量的自体优质脂肪组织，从而避免机体排斥，提高移植疗效。但机体内环境特殊，人体内间充质干细胞定向成脂分化调控复杂，因此如何通过药物高效促进人间充质干细胞在体外定向成脂分化，是获得足量优质自体脂肪细胞，为临床整形及塑性提供合格移植用脂肪组织的关键，但在现有条件下，人间充质干细胞成脂分化效率有限。因此，为获得足量的间充质干细胞来源的软骨细胞进行临床应用，需通优化特定培养条件，促进定向分化。现有人间充质干细胞成脂诱导分化培养基成分一般为：DMEM培养基、10％胎牛血清(FBS)、100nM地塞米松、0.5mM1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(IBMX)、10μg/ml胰岛素，200μM吲哚美辛。

公开号为CN 104830757 A的中国发明专利，公开了一种间充质干细胞成脂诱导诱导分化组合物及使用方法。该培养基在DMEM/F12培养基基础上，添加10％胎牛血清(体积百分比)、1％谷氨酰胺(体积百分比)、1％(体积百分比)青霉素/链霉素抗生素、200μM吲哚美辛、100ng/ml胰岛素、10nM地塞米松、1μM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤，以及0.1μM盐酸法舒地尔。经3周诱导培养后进行油红O染色及成脂相关基因表达水平鉴定。该培养基只针对人骨髓、脐带，羊膜来源间充质干细胞进行成脂诱导分化，诱导分化效率优势不明显，且其所含盐酸法舒地尔，具有扩管作用，临床使用存在出血等不良反应，缺乏实际应用价值。

综上所述，现有的成脂诱导分化培养基还无法高效稳定诱导人多种组织来源间充质干细胞向成脂细胞分化，仍需更为优化的分化诱导条件提高人间充质干细胞成脂诱导分化效率，从而为间充质干细胞成脂分化能力鉴定及临床基于自体脂肪移植的整容塑性治疗提供有利条件。

发明内容