[发明专利]一种高密度发酵培养纤细裸藻的方法

权利要求书

1.一种高密度发酵培养纤细裸藻的方法，包括如下步骤：

（1）将纤细裸藻纯种接种至培养液中进行摇瓶培养，培养温度为25～35℃，培养转速为150～250rpm，培养时间为20～35h，得初步培养的纤细裸藻；

（2）将初步培养的纤细裸藻转接入营养液中进行恒温恒转速培养，培养温度为25～30℃，培养转速为150～250rpm，培养时间为16～20h，同时测定藻细胞的生物量干重；

（3）步骤（2）得到的藻液中藻细胞的生物量干重大于18～22g/L时，按步骤（1）的培养条件重复进行培养，直至藻种中纤细裸藻生物量干重达到10～12g/L；

（4）步骤（2）得到的藻液中藻细胞的生物量干重达到10～12g/L，直接接种到种子培养液中进行发酵异养培养，异养培养中维持pH值3.5～5.5，培养温度控制在25～35℃，通气量控制在0.3～0.5vvm，培养至发酵罐中营养液葡萄糖耗尽，停止培养；

（5）将步骤（4）种子罐中的藻液以5～10%的接种量接种到装有营养液的下一级发酵罐中进行发酵培养；培养条件为温度22～33℃，通气量0.3～0.5vvm，营养液中葡萄糖浓度通过流加的方式维持在30～50g/L，发酵过程中氮源浓度通过流加氮源溶液使其维持在15～25g/L， pH维持在3.5～5.5；当发酵罐中纤细裸藻生物量达到25-40g/L时，停止补料，至发酵终点糖含量耗至0g/L时，结束发酵。

2.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（2）初步培养的纤细裸藻的接入量为营养液体积的5～10%。

3.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（4）中，步骤（2）得到的藻液中藻细胞的生物量干重达到10～12g/L，直接接种到种子罐中进行发酵异养培养，藻液的接种量为种子培养液体积的5～10%。

4.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（4）中，通过加入盐酸或液碱调节pH值在3.5～5.5。

5.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（1）、（2）中的培养液组分相同，配方如下：硫酸铵0.8～1.2g/L、酵母抽提物10～25g/L、葡萄糖30～50g/L、酸二氢钾1.9～2.lg/L、硫酸镁1. 8～2.2g/L、氯化钙0.14～0.16g/L、硫酸钠5.0～10.0g/L、氯化钾0.6～0.8g/L、磷五水硫酸铜1.4～1.6mg/L、四水氯化锰1.68～1.72mg/L、二水钼酸钠0～0.05mg/L、六水氯化钴0～0.05mg/L、七水硫酸锌2.8～3.0mg/L。

6.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（4）中的种子培养液与步骤（5）中的营养液相同，配方如下：葡萄糖50.0～70.0g/L、酵母抽提物2.9～3.lg/L、谷氨酸钠5.0～15.0g/L玉米浆干粉15～20g/L、硫酸镁1.8～2.2g/L、、磷酸二氢钾1.9～2.lg/L、氯化钙0.14～0.16g/L、硫酸钠5.0～10.0g/L、氯化钾0.6～0.8g/L、五水硫酸铜1.4～1.6mg/L、七水硫酸锌2.8～3.0mg/L、硫酸铵0.8～1.2g/L、二水钼酸钠0～0.05mg/L、四水氯化锰1.68～1.72mg/L、六水氯化钴0～0.05mg/L。

7.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述的氮源溶液为酵母抽提物、玉米浆干粉、谷氨酸钠或蛋白胨中的一种或两种以上混合；通过流加盐酸或液碱的方法调节pH。

8.根据权利要求1所述的高密度发酵培养纤细裸藻的方法，其特征在于，步骤（4）和（5）中用于调节营养液pH的盐酸的浓度为10～15%（V/V），液碱的浓度为30～40%（W/V）。