[发明专利]靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂及其鉴定方法在审
申请号: | 201810191281.1 | 申请日: | 2018-03-08 |
公开(公告)号: | CN108341874A | 公开(公告)日: | 2018-07-31 |
发明(设计)人: | 梁欣;刘建文;亓莹雪 | 申请(专利权)人: | 华东理工大学 |
主分类号: | C07K16/28 | 分类号: | C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577;C12Q1/02 |
代理公司: | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人: | 王洁;郑暄 |
地址: | 200237 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 肿瘤转移抑制剂 靶向 小鼠 血小板膜糖蛋白 单克隆抗体 验证 血小板膜蛋白 有效抑制肿瘤 肿瘤转移过程 正常血小板 血小板 模型验证 细胞转移 作用机制 靶向性 研究 | ||
1.一种靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂,其特征在于,所述的肿瘤转移抑制剂为单克隆抗体1D12或2B4。
2.一种用于鉴定权利要求1中所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂的方法,其特征在于,所述的方法包括:
第一鉴定模型,利用酶联免疫吸附技术,检测样品对血小板GPIb-IX复合物的结合能力;
第二鉴定模型,利用免疫印迹法,检测样品在血小板膜上的具体结合位置;
第三鉴定模型,利用连续光谱荧光仪,检测样品对血小板与肿瘤细胞的粘附作用,以鉴定样品对血小板与肿瘤细胞粘附的抑制作用;
第四鉴定模型,利用流式细胞术检测血小板活性蛋白的表达,以检测样品对血小板活性及功能的影响。
3.根据权利要求2中所述的用于鉴定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂的方法,其特征在于,所述的第一鉴定模型具体包括:
采用ELISA技术,依照双抗体夹心法原理,首先将靶向血小板膜糖蛋白GPIX的单克隆抗体吸附于酶标板上,加入微量血小板裂解液,使其抓取其中的GPIb-IX复合物,之后加入样品,使靶向GPIb-IX复合物的样品结合,最后加入酶标记抗体后显色,最终通过酶标仪读取OD值。
4.根据权利要求2中所述的用于鉴定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂的方法,其特征在于,所述的第二鉴定模型通过最终条带位置确定样品与血小板裂解液的结合位置,以证明样品靶向GPIbα。
5.根据权利要求2中所述的用于鉴定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂的方法,其特征在于,所述的第三鉴定模型中的肿瘤细胞为小鼠LLC细胞,并且所述的肿瘤细胞经缺氧24小时复氧2~4小时培养活化后与荧光染料标记的血小板共孵育。
6.根据权利要求2中所述的用于鉴定所述的靶向小鼠血小板膜糖蛋白GPIbα的肿瘤转移抑制剂的方法,其特征在于,所述的第四鉴定模型中的血小板活性检测为对血小板活性蛋白P-selectin表达的检测。
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